1. 匀浆处理:a.组织 将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。
b.单层培养细胞 直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞,每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml,用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定,不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。
c.细胞悬液 离心收集细胞,每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol,反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。
3.可选步骤:如样品中含有较多蛋白质,脂肪,多糖或胞外物质(肌肉,植物结节部分等)可于2-8℃10000×g离心10分钟,取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜,多糖,高分子量DNA,上清中含有RNA。处理脂肪组织时,上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2m,剧烈振荡15秒,室温放置3分钟。
6. 2-8℃10000×g离心15分钟。样品分为三层:底层为黄色有机相,上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中,水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。
7. 把水相转移到新管中,如要分离DNA和蛋白质可保留有机相,进一步操作见后。用异丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml异丙醇,室温放置10分钟。
8. 2-8℃10000×g离心10分钟,离心前看不出RNA沉淀,离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。
9. 用75℅乙醇洗涤RNA沉淀。每使用1ml TRIzol至少加1ml 75℅乙醇。2-8℃不超过7500×g离心5分钟,弃上清。
10.室温放置干燥或真空抽干RNA沉淀,大约晾5-10分钟即可.不要真空离心干燥,过于干燥会导致RNA的溶解性大大降低。加入25-200μl无RNase的水或0.5℅SDS,用枪头吸打几次,55-60℃放置10分钟使RNA溶解.如RNA用于酶切反应,勿使用SDS溶液。RNA也可用100℅的去离子甲酰胺溶解,-70℃保存。
shgoy-2050盐酸妥拉唑林英文名称:Tolazoline hydrochloride规格:50mg保存:-20℃,避光
shgoy-2051利多卡因英文名称:Lidocaine规格:100mg保存:-20℃,避光
shgoy-2052盐酸利多卡因英文名称:Lidocaine hydrochloride规格:100mg保存:-20℃,避光
shgoy-2053硝苯地平杂质B英文名称:Nifedipine?impurity B规格:30mg保存:-20℃,避光
shgoy-2054硝苯地平杂质A英文名称:Nifedipine?impurity A规格:30mg保存:-20℃,避光
shgoy-2055硝苯地平英文名称:Nifedipine规格:100mg保存:-20℃,避光
shgoy-2056酮洛芬英文名称:Tong Luofen规格:100mg保存:-20℃,避光
shgoy-2057替硝唑英文名称:Tinidazole规格:100mg保存:-20℃,避光
shgoy-2058舒林酸英文名称:Sulindac规格:50mg保存:-20℃,避光
shgoy-2059双氯芬酸钠英文名称:Diclofenac sodium规格:100mg保存:-20℃,避光
shgoy-2060曲安西龙英文名称:Qu Anxilong规格:50mg保存:-20℃,避光
shgoy-2061葡萄糖酸锌英文名称:Zinc gluconate规格:200mg保存:-20℃,避光
shgoy-2062扑米酮英文名称:Primidone规格:50mg保存:-20℃,避光
shgoy-2063萘普生钠英文名称:Naproxen sodium规格:50mg保存:-20℃,避光
shgoy-2064硫酸普拉睾酮钠英文名称:Sodium Prasterone Sulfate规格:50mg保存:-20℃,避光
shgoy-2065硫酸沙丁胺醇英文名称:Salbutamol sulfate规格:100mg保存:-20℃,避光
shgoy-2066联苯苄醇英文名称:Biphenyl?benzyl alcohol规格:50mg保存:-20℃,避光
shgoy-2067联苯苄唑英文名称:Bifonazole规格:50mg保存:-20℃,避光
shgoy-2068氯碘羟喹英文名称:Clioquinol规格:100mg保存:-20℃,避光
shgoy-2069林旦英文名称:Lin Dan规格:50mg保存:-20℃,避光
phospho-DAB2 (Ser24)磷酸化信号转导功能磷蛋白DAB2抗体
DUOX1双氧化酶1/甲状腺氧化酶1抗体
DUOX2双氧化酶2/甲状腺氧化酶2抗体
DUOXA1双氧化酶成熟因子抗体
DOCK7胞质分裂专一蛋白7抗体
DDIT4LDNA损伤诱导转录样蛋白4抗体
DAP3死亡相关蛋白3抗体
Defensin alpha 6防御素α6抗体
DBF4BS期激酶活化蛋白DBF4B抗体
DCK脱氧胞苷激酶抗体
一步式胞浆蛋白微量制备试剂盒30 次包装DHRS3短链脱氢还原酶3抗体
DNA Polymerase theta/POLHDNA聚合酶θ/DNA pol θ抗体
DENND2DDENN域内含蛋白2D抗体
Alpha Dystroglycan肌萎缩相关蛋白DAG1抗体
phospho-DAG1 (Tyr892)磷酸化肌萎缩相关蛋白DAG1抗体
phospho-DAAM1 (Thr361)磷酸化形态发生关联激活因子1抗体
phospho-DOK1 (Tyr398)磷酸化D酪氨酸激酶衰减蛋白1抗体
phospho-DAXX (Ser213)磷酸化Fas相关死亡结构域蛋白抗体
phospho-DOK1(Tyr362)磷酸化D酪氨酸激酶衰减蛋白1抗体
phospho-DAXX (Ser495)磷酸化Fas相关死亡结构域蛋白抗体
phospho-DAXX (Ser517)磷酸化Fas相关死亡结构域蛋白抗体
phospho-DAXX (Ser671)磷酸化Fas相关死亡结构域蛋白抗体
一步式胞浆蛋白微量制备试剂盒30 次包装技术优势
1. 能有效的处理土壤样品中一些很难处理的组分如: 真细菌孢子(eubacterial spores)、内芽孢(endospores)、格兰仕阳性菌(gram positive bacteria)、酵母(yeast)、线虫(nematodes)、海藻(algea)、真菌(fungi)等。
2. 样品处理过程中使用的 MT Buffer和Sodium Phosphate Buffer可在整个提取过程中有效的保护核酸,并大限度的降低RNA污染。
3. 基于硅珠的纯化方法,可有效地去除腐植酸、多元酚等PCR抑制物
4. 纯化所得的DNA可直接用于PCR、酶切等后续实验之中。
5. 对腐植酸含量特别高的样品,附加额外的处理方法。