1. 匀浆处理:a.组织 将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。
b.单层培养细胞 直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞,每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml,用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定,不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。
c.细胞悬液 离心收集细胞,每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol,反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。
3.可选步骤:如样品中含有较多蛋白质,脂肪,多糖或胞外物质(肌肉,植物结节部分等)可于2-8℃10000×g离心10分钟,取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜,多糖,高分子量DNA,上清中含有RNA。处理脂肪组织时,上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2m,剧烈振荡15秒,室温放置3分钟。
6. 2-8℃10000×g离心15分钟。样品分为三层:底层为黄色有机相,上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中,水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。
7. 把水相转移到新管中,如要分离DNA和蛋白质可保留有机相,进一步操作见后。用异丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml异丙醇,室温放置10分钟。
8. 2-8℃10000×g离心10分钟,离心前看不出RNA沉淀,离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。
9. 用75℅乙醇洗涤RNA沉淀。每使用1ml TRIzol至少加1ml 75℅乙醇。2-8℃不超过7500×g离心5分钟,弃上清。
10.室温放置干燥或真空抽干RNA沉淀,大约晾5-10分钟即可.不要真空离心干燥,过于干燥会导致RNA的溶解性大大降低。加入25-200μl无RNase的水或0.5℅SDS,用枪头吸打几次,55-60℃放置10分钟使RNA溶解.如RNA用于酶切反应,勿使用SDS溶液。RNA也可用100℅的去离子甲酰胺溶解,-70℃保存。
shgoy-10496,7-二甲氧基香豆素英文名称:6,?7- two?methoxy?coumarin规格:20mg保存:-20℃,避光
shgoy-10507-羟基香豆素英文名称:7- hydroxy coumarin规格:20mg保存:-20℃,避光
shgoy-1051藁本内酯英文名称:Ligustilide规格:约0.1mL保存:-20℃,避光
shgoy-1052路路通酸英文名称:Passepartout?acid规格:20mg保存:-20℃,避光
shgoy-1053紫堇灵英文名称:Corynoline规格:20mg保存:-20℃,避光
shgoy-1054秦皮素英文名称:Aesculetin规格:20mg保存:-20℃,避光
shgoy-1055哈巴苷英文名称:Harpagide规格:20mg保存:-20℃,避光
shgoy-1056柳穿鱼叶苷英文名称:Linaria vulgaris?leaf glycoside规格:20mg保存:-20℃,避光
shgoy-1057胡黄莲苷-I英文名称:Hu Huanglian?glycoside -I规格:20mg保存:-20℃,避光
shgoy-10581,3-0二咖啡酰奎宁酸英文名称:1,3-0 two?caffeoylquinic acid规格:20mg保存:-20℃,避光
shgoy-1059胡薄荷酮英文名称:Pulegone规格:0.2ml保存:-20℃,避光
shgoy-1060(-)-薄荷酮英文名称:(-)?-?menthone规格:0.2ml保存:-20℃,避光
shgoy-1061芒柄花素英文名称:Formotin规格:20mg保存:-20℃,避光
shgoy-1062梣酮英文名称:Fraxinellone规格:20mg保存:-20℃,避光
shgoy-1063莲心硷高氯酸盐英文名称:Liensinine perchlorate规格:20mg保存:-20℃,避光
shgoy-1064十七碳酸甲酯英文名称:Seventeen?methyl carbonate规格:20mg保存:-20℃,避光
shgoy-1065甘油三亚油酸酯英文名称:Sanya?oleic acid ester?of glycerol规格:0.15ml保存:-20℃,避光
shgoy-1066甘油三油酸酯英文名称:Three oleic acid?ester?of glycerol规格:0.15ml保存:-20℃,避光
shgoy-1067香荆芥酚英文名称:Carvacrol规格:0.15ml保存:-20℃,避光
shgoy-1068白果新酸(银杏酸)英文名称:Ginkgolic acid?(Yin Xingsuan)规格:20mg保存:-20℃,避光
shgoy-1069β,β-二甲基丙烯酰阿卡宁英文名称:Beta,?beta?two methyl?acryloyl?Akanin规格:20mg保存:-20℃,避光
C2orf612号染色体开放阅读框61抗体
CA153乳腺癌相关抗原抗体
CDCA4细胞分裂周期相关蛋白4抗体
Cytochrome b5细胞色素b5抗体
CNR2钙粘蛋白相关的神经受体2抗体
C1orf1861号染色体开放阅读框186抗体
CXCL16CXC趋化因子16抗体
Complement C3c alpha' chain fragment 2补体C3cα片段2抗体
福林酚试剂100mL包装Complement C3c alpha' chain fragment 1补体C3cα 链片段1抗体
Complement C3dg fragment补体C3dg片段抗体
Complement C3g fragment补体C3g片段抗体
Complement C3d fragment补体C3d片段抗体
CD28CD28抗体
CAPZA2F肌动蛋白α2亚基抗体
CREM环磷酸腺苷反应元件调节蛋白抗体
Cystatin A胱抑素A/半胱氨酸蛋白酶抑制剂A抗体
CLIC1氯离子通道蛋白27抗体
Claudin 8紧密连接蛋白8抗体
Phospho-Caspase-9 (Ser196)磷酸化半胱氨酸蛋白酶9抗体
phospho-Cdc25B (Ser353)磷酸化细胞分裂周期蛋白25B抗体
phospho-CDKN1B (Thr157)磷酸化P27抗体/周期素依赖激酶抑制剂抗体
phospho-CDKN1B (Thr187)磷酸化P27抗体/周期素依赖激酶抑制剂抗体
phospho-CDKN1B (Ser178)磷酸化P27抗体/周期素依赖激酶抑制剂抗体
phospho-CDKN1A (Thr145)磷酸化p21蛋白抗体
phospho-CDKN1A (Thr57)磷酸化p21蛋白抗体
c8orf848号染色体开放阅读框84抗体
福林酚试剂100mL包装技术优势
1. 能有效的处理土壤样品中一些很难处理的组分如: 真细菌孢子(eubacterial spores)、内芽孢(endospores)、格兰仕阳性菌(gram positive bacteria)、酵母(yeast)、线虫(nematodes)、海藻(algea)、真菌(fungi)等。
2. 样品处理过程中使用的 MT Buffer和Sodium Phosphate Buffer可在整个提取过程中有效的保护核酸,并大限度的降低RNA污染。
3. 基于硅珠的纯化方法,可有效地去除腐植酸、多元酚等PCR抑制物
4. 纯化所得的DNA可直接用于PCR、酶切等后续实验之中。
5. 对腐植酸含量特别高的样品,附加额外的处理方法。