1. 匀浆处理:a.组织 将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。
b.单层培养细胞 直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞,每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml,用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定,不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。
c.细胞悬液 离心收集细胞,每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol,反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。
3.可选步骤:如样品中含有较多蛋白质,脂肪,多糖或胞外物质(肌肉,植物结节部分等)可于2-8℃10000×g离心10分钟,取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜,多糖,高分子量DNA,上清中含有RNA。处理脂肪组织时,上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2m,剧烈振荡15秒,室温放置3分钟。
6. 2-8℃10000×g离心15分钟。样品分为三层:底层为黄色有机相,上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中,水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。
7. 把水相转移到新管中,如要分离DNA和蛋白质可保留有机相,进一步操作见后。用异丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml异丙醇,室温放置10分钟。
8. 2-8℃10000×g离心10分钟,离心前看不出RNA沉淀,离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。
9. 用75℅乙醇洗涤RNA沉淀。每使用1ml TRIzol至少加1ml 75℅乙醇。2-8℃不超过7500×g离心5分钟,弃上清。
10.室温放置干燥或真空抽干RNA沉淀,大约晾5-10分钟即可.不要真空离心干燥,过于干燥会导致RNA的溶解性大大降低。加入25-200μl无RNase的水或0.5℅SDS,用枪头吸打几次,55-60℃放置10分钟使RNA溶解.如RNA用于酶切反应,勿使用SDS溶液。RNA也可用100℅的去离子甲酰胺溶解,-70℃保存。
小鼠血浆α颗粒膜蛋白(GMP-140)ELISA Kit,48T/96T
大鼠血浆α颗粒膜蛋白(GMP-140)ELISA Kit,48T/96T
兔血浆α颗粒膜蛋白(GMP-140)ELISA Kit,48T/96T
鸡热休克蛋白70(HSP-70)ELISA Kit,48T/96T
人皮肤T细胞虏获趋化因子(CTACK/CCL27)ELISA Kit,48T/96T
人胸腺肽α1(Thymosin α1)ELISA Kit,48T/96T
人降解加速因子(DAF)ELISA Kit,48T/96T
人神经氨酸酶(NA)ELISA Kit,48T/96T
人天门冬氨酸转氨酶/谷草转氨酶(GOT/GPT)ELISA Kit,48T/96T
人原钙黏素1(PCDH1)ELISA Kit,48T/96T
人GTP酶活化蛋白(GAP)ELISA Kit,48T/96T
人鸟苷酸解离抑制因子(GDI)ELISA Kit,48T/96T
人抗信号识别颗粒抗体(SRP)ELISA Kit,48T/96T
人粒细胞特异性抗核抗体(GS-ANA)ELISA Kit,48T/96T
人抗类固醇细胞抗体(SCA)ELISA Kit,48T/96T
人甲状腺非肽激素抗体(THAA)ELISA Kit,48T/96T
人肺表面活性物质相关蛋白B(SP-B)ELISA Kit,48T/96T
人肺表面活性物质相关蛋白C(SP-C)ELISA Kit,48T/96T
人胞浆型磷脂酶A2(cPLA2)ELISA Kit,48T/96T
大鼠多巴胺转运蛋白(DAT)ELISA Kit,48T/96T
人肺表面活性物质相关蛋白D(SP-D)ELISA Kit,48T/96T
小鼠β连环蛋白/联蛋白(β-Cat)ELISA Kit,48T/96T
大鼠金属硫蛋白(MT)ELISA Kit,48T/96T
Phospho-BAP1 (Ser592)磷酸化乳腺癌易感基因1抗体
Phospho-Bcl-2 (Ser70)磷酸化Bcl-2抗体
Phospho-Bcl-2 (Thr56)磷酸化Bcl-2抗体
Phospho-Bcr (Tyr177)磷酸化T淋巴细胞受体抗体
BIN3细胞骨架衔接蛋白BIN3抗体
BOD1双向染色体细胞分裂蛋白1抗体
BRN3A转录因子Brn3蛋白抗体Brn3α
BMP6骨形态发生蛋白6抗体
BNP脑钠素抗体
BMP3骨形态发生蛋白3抗体
Bag1抑凋亡基因bag1抗体
SDS-PAGE 电泳液 ( 干粉 )20L包装Brs3蛙皮素受体3抗体
BMP8骨形态发生蛋白8抗体
BMP6骨形态发生蛋白6抗体
Phospho-Bcl2 (Ser87)磷酸化Bcl-2抗体
Phospho-Bcl2 (Thr69)磷酸化Bcl-2抗体
phospho-Bcl-xL (Thr47)磷酸化Bcl-xL蛋白抗体
BDP神经母细胞瘤相关蛋白ARID3B抗体
beta IV Tubulin微管蛋白β4抗体
beta subunit Cholera Toxin霍乱肠毒素β链抗体
beta B1 Crystallinβ晶体蛋白B1抗体
phospho-Bax (Thr167)磷酸化Bax抗体
phospho-BCAR1(Tyr165)磷酸化乳腺癌抗雌激素耐药蛋白1抗体
phospho-BCAR1 (Tyr249)磷酸化乳腺癌抗雌激素耐药蛋白1抗体
phospho-BCAR1 (Tyr751)磷酸化乳腺癌抗雌激素耐药蛋白1抗体
SDS-PAGE 电泳液 ( 干粉 )20L包装技术优势
1. 能有效的处理土壤样品中一些很难处理的组分如: 真细菌孢子(eubacterial spores)、内芽孢(endospores)、格兰仕阳性菌(gram positive bacteria)、酵母(yeast)、线虫(nematodes)、海藻(algea)、真菌(fungi)等。
2. 样品处理过程中使用的 MT Buffer和Sodium Phosphate Buffer可在整个提取过程中有效的保护核酸,并大限度的降低RNA污染。
3. 基于硅珠的纯化方法,可有效地去除腐植酸、多元酚等PCR抑制物
4. 纯化所得的DNA可直接用于PCR、酶切等后续实验之中。
5. 对腐植酸含量特别高的样品,附加额外的处理方法。