1. 匀浆处理:a.组织 将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。
b.单层培养细胞 直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞,每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml,用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定,不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。
c.细胞悬液 离心收集细胞,每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol,反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。
3.可选步骤:如样品中含有较多蛋白质,脂肪,多糖或胞外物质(肌肉,植物结节部分等)可于2-8℃10000×g离心10分钟,取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜,多糖,高分子量DNA,上清中含有RNA。处理脂肪组织时,上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2m,剧烈振荡15秒,室温放置3分钟。
6. 2-8℃10000×g离心15分钟。样品分为三层:底层为黄色有机相,上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中,水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。
7. 把水相转移到新管中,如要分离DNA和蛋白质可保留有机相,进一步操作见后。用异丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml异丙醇,室温放置10分钟。
8. 2-8℃10000×g离心10分钟,离心前看不出RNA沉淀,离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。
9. 用75℅乙醇洗涤RNA沉淀。每使用1ml TRIzol至少加1ml 75℅乙醇。2-8℃不超过7500×g离心5分钟,弃上清。
10.室温放置干燥或真空抽干RNA沉淀,大约晾5-10分钟即可.不要真空离心干燥,过于干燥会导致RNA的溶解性大大降低。加入25-200μl无RNase的水或0.5℅SDS,用枪头吸打几次,55-60℃放置10分钟使RNA溶解.如RNA用于酶切反应,勿使用SDS溶液。RNA也可用100℅的去离子甲酰胺溶解,-70℃保存。
人抗核仁纤维蛋白抗体(AFA/snoRNP/U3RNP)ELISA Kit,48T/96T
人天青杀素(AZU)ELISA Kit,48T/96T
人生长激素释放因子(GH-RF)ELISA Kit,48T/96T
人软骨糖蛋白39(HC gp-39)ELISA Kit,48T/96T
人溶酶体相关膜蛋白2(HLAMP-2)ELISA Kit,48T/96T
人脱氧胶原吡啶交联(DPD)ELISA Kit,48T/96T
人胶原吡啶交联(PYD)ELISA Kit,48T/96T
人羟基胶原吡啶交联(OH-PYD)ELISA Kit,48T/96T
人肿瘤坏死因子相关激活诱导因子(TRANCE)ELISA Kit,48T/96T
人破骨细胞分化因子(ODF)ELISA Kit,48T/96T
小鼠破骨细胞分化因子(ODF)ELISA Kit,48T/96T
大鼠破骨细胞分化因子(ODF)ELISA Kit,48T/96T
人螺旋肽(Helical Peptide)ELISA Kit,48T/96T
人Ⅱ型胶原螺旋肽(HELIX-Ⅱ)ELISA Kit,48T/96T
人碱性磷酸酶(ALP)ELISA Kit,48T/96T
小鼠碱性磷酸酶(ALP)ELISA Kit,48T/96T
大鼠碱性磷酸酶(ALP)ELISA Kit,48T/96T
人基质裂解素(ST3)ELISA Kit,48T/96T
人基质裂解素(ST2)ELISA Kit,48T/96T
人基质裂解蛋白(MAT)ELISA Kit,48T/96T
人基质裂解素(ST1)ELISA Kit,48T/96T
人基质γ羧基谷氨酸蛋白(MGP)ELISA Kit,48T/96T
人红细胞刺激因子(ESF)ELISA Kit,48T/96T
BCCIP乳腺癌易感基因2和p21蛋白抑制因子抗体
Blood Group Antigen Precursor血型抗原前体蛋白抗体
CD238凯尔血型糖蛋白CD238抗体
BTN2A2嗜乳脂蛋白亚家族2成员A2抗体
BMP10骨形态发生蛋白10抗体
BrdU (A7)溴脱氧尿苷单克隆抗体(增殖标志物)
BEND2BEND2蛋白抗体
Bone Sialoprotein骨涎蛋白
Vibrio Parahemolyticus Polar flagellin B/D副溶血性弧菌菌体鞭毛蛋白抗体
一站式 CTAB-PAGE 电泳套装30 次包装BTBD6BTBD6蛋白抗体
BMPERBMP内皮细胞调节蛋白抗体
HCV NS5A transactivated protein 8丙肝病毒NS5A反转录蛋白8抗体
BMP1骨形态发生蛋白1/胶原C蛋白肽链内切酶抗体
BMP9骨形态发生蛋白9抗体
Beta tubulin cofactor D微管蛋白β辅助因子D抗体
BTR1钙粘蛋白相关蛋白受体BTR1抗体
Bub3有丝分裂蛋白BUB3抗体
BHLHB9/p60TRPp60TRP蛋白抗体
BLMH博莱霉素水解酶抗体
Aggrecan短蛋白聚糖抗体
BTBD3BTB/POZ结构域蛋白3抗体
BBS12巴尔得-别德尔综合征相关蛋白12抗体
BZW1碱性亮氨酸拉链蛋白BZW1抗体
BMPR1B骨形态发生蛋白受体1B抗体
BNIP1Bcl2相互作用蛋白1抗体(转化相关基因8蛋白)
BMP5骨形态发生蛋白5抗体
BMP15骨形态发生蛋白15抗体
Bcl2L2Bcl-2样蛋白2抗体
一站式 CTAB-PAGE 电泳套装30 次包装技术优势
1. 能有效的处理土壤样品中一些很难处理的组分如: 真细菌孢子(eubacterial spores)、内芽孢(endospores)、格兰仕阳性菌(gram positive bacteria)、酵母(yeast)、线虫(nematodes)、海藻(algea)、真菌(fungi)等。
2. 样品处理过程中使用的 MT Buffer和Sodium Phosphate Buffer可在整个提取过程中有效的保护核酸,并大限度的降低RNA污染。
3. 基于硅珠的纯化方法,可有效地去除腐植酸、多元酚等PCR抑制物
4. 纯化所得的DNA可直接用于PCR、酶切等后续实验之中。
5. 对腐植酸含量特别高的样品,附加额外的处理方法。