1. 匀浆处理:a.组织 将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。
b.单层培养细胞 直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞,每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml,用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定,不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。
c.细胞悬液 离心收集细胞,每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol,反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。
3.可选步骤:如样品中含有较多蛋白质,脂肪,多糖或胞外物质(肌肉,植物结节部分等)可于2-8℃10000×g离心10分钟,取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜,多糖,高分子量DNA,上清中含有RNA。处理脂肪组织时,上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2m,剧烈振荡15秒,室温放置3分钟。
6. 2-8℃10000×g离心15分钟。样品分为三层:底层为黄色有机相,上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中,水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。
7. 把水相转移到新管中,如要分离DNA和蛋白质可保留有机相,进一步操作见后。用异丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml异丙醇,室温放置10分钟。
8. 2-8℃10000×g离心10分钟,离心前看不出RNA沉淀,离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。
9. 用75℅乙醇洗涤RNA沉淀。每使用1ml TRIzol至少加1ml 75℅乙醇。2-8℃不超过7500×g离心5分钟,弃上清。
10.室温放置干燥或真空抽干RNA沉淀,大约晾5-10分钟即可.不要真空离心干燥,过于干燥会导致RNA的溶解性大大降低。加入25-200μl无RNase的水或0.5℅SDS,用枪头吸打几次,55-60℃放置10分钟使RNA溶解.如RNA用于酶切反应,勿使用SDS溶液。RNA也可用100℅的去离子甲酰胺溶解,-70℃保存。
人激肽释放酶1(KLK 1)ELISA Kit,48T/96T AQP-5(Human Aquaporin 5) ELISA Kit 人水通道蛋白5
大鼠孕酮受体(PGR)ELISA Kit,48T/96T AQP-4(Human Aquaporin 4) ELISA Kit 人水通道蛋白4
蝶蛹金小蜂卵黄蛋白原(Vtg)ELISA Kit,48T/96T AQP-3(Human Aquaporin 3) ELISA Kit 人水通道蛋白3
小鼠肺部活化调节趋化因子(PARC/CCL18)ELISA Kit,48T/96T , AQP-2(Human Aquaporin 2) ELISA Kit 人水通道蛋白2
猫汉赛巴通体(CBH)ELISA Kit,48T/96T AQP-1(Human Aquaporin 1) ELISA Kit 人水通道蛋白1
人可溶性CD146分子(sCD146)ELISA Kit,48T/96T AQP-0(Human Aquaporin 0) ELISA Kit 人水通道蛋白0
大鼠磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)ELISA Kit,48T/96T RF(Human rheumatoid factor) ELISA Kit 人类风湿因子
大鼠促性腺激素释放激素受体(GnRHR)ELISA Kit,48T/96T ASO(Human anti-streptolysin O) ELISA Kit 人抗链球菌溶血素O/抗O
大鼠整合素αM型((ITG αM/CD11b)ELISA Kit,48T/96T ACA(Human adrenal cortex antibody) ELISA Kit 人肾上腺皮质抗体
小鼠乙酰胆碱受体抗体(AChRab)ELISA Kit,48T/96T GBM(Human glomerular basement membrane antibogy) ELISA Kit 人抗肾小球基底膜抗体
猴子乙酰胆碱受体抗体(AChRab)ELISA Kit,48T/96T BMG/ Beta2-MG(Human Beta2-microglobulin) ELISA Kit 人β2微球蛋白
猪乙酰胆碱受体抗体(AChRab)ELISA Kit,48T/96T ANX- V (Human Annexin V ) ELISA Kit 人膜联蛋白Ⅴ
大鼠乙酰胆碱受体抗体(AChRab)ELISA Kit,48T/96T TBM(Human tubular basement membrane antibogy) ELISA Kit 人抗肾小管基底膜抗体
兔乙酰胆碱受体抗体(AChRab)ELISA Kit,48T/96T AP13(Human apelin 13) ELISA Kit 人apelin 13
犬维生素K1(VK1)ELISA Kit,48T/96T AP36(Human Apelin 36) ELISA Kit 人Apelin 36
人维生素K1(VK1)ELISA Kit,48T/96T Tn-T(Human Troponin T) ELISA Kit 人肌钙蛋白T
小鼠维生素K1(VK1)ELISA Kit,48T/96T ES-Ab(Human anti-Endostatin antibody) ELISA Kit 人血管内皮抑素抗体
植物维生素K1(VK1)ELISA Kit,48T/96T Agtr I a(Human angiotensin II receptor type I a) ELISA Kit 人血管紧张素Ⅱ受体Ⅰa型
大鼠维生素K1(VK1)ELISA Kit,48T/96T ANGPTL3(Human angiopoietin-like protein 3) ELISA Kit 人血管生成素样蛋白3
犬组胺(HIS)ELISA Kit,48T/96T Alpha Actin(Human Alpha-Actin) ELISA Kit 人α肌动蛋白
豚鼠组胺(HIS)ELISA Kit,48T/96T ANKRD1(Human cardiac ankyrin repeat domain 1) ELISA Kit 人心肌锚蛋白重复域1
人组胺(HIS)ELISA Kit,48T/96T LEPR(Human Leptin Receptor) ELISA Kit 人瘦素受体
小鼠组胺(HIS)ELISA Kit,48T/96T AT2R(Human Angiotensin II Receptor 2) ELISA Kit 人血管紧张素Ⅱ受体2
AIM2干扰素诱导蛋白AIM2抗体
Aquaporine 2水通道蛋白-2抗体
ABI2肿瘤抑制基因ABI2/精氨酸酪氨酸蛋白激酶结合蛋白抗体
ARL11ADP核糖基化因子样11抗体
ARMCX3ARM重复X连锁蛋白ARMCX3抗体
ARMCX1ARM重复X连锁蛋白ARMCX1抗体
ARMCX2ARM重复X连锁蛋白ARMCX2抗体
Apg10自噬相关蛋白10抗体
ACBD6酰基辅酶A结合结构域蛋白6抗体
Aminoacylase 1氨基酰化酶1抗体
质谱兼容型蛋白银染试剂盒10 次包装Adipose Triglyceride Lipase脂肪甘油三酯脂酶抗体
phospho-AMPK alpha-1 (Thr172)磷酸化腺苷单磷酸活化蛋白激酶α1抗体
Amphiregulin双调蛋白(结肠直肠细胞源性生长因子)抗体
phospho-AQP2(Ser264)磷酸化水通道蛋白2抗体
AXL粘附相关激酶抗体
phospho-AXL (Tyr698+Tyr702+Tyr703)磷酸化粘附相关激酶抗体
phospho-AKT1 + AKT2 + AKT3 (Thr308+Thr309+Thr305)磷酸化蛋白激酶B抗体
phospho-AQP2(Ser269)磷酸化水通道蛋白2抗体
phospho-Amyloid Precursor Protein (Thr743)磷酸化APP淀粉样肽前体蛋白抗体
phospho-AKT1(Ser129)磷酸化蛋白激酶B抗体
phospho-Amyloid Precursor Protein (Ser198)磷酸化APP淀粉样肽前体蛋白抗体
phospho-ATF4 (Ser245)磷酸化活化转录因子4抗体
phospho-Androgen Receptor (Ser213)磷酸化雄激素受体抗体
phospho-Androgen Receptor (Ser650)磷酸化雄激素受体抗体
phospho-AKT1+2+3 (Tyr315+316+312) 磷酸化蛋白激酶AKT1,2,3抗体
质谱兼容型蛋白银染试剂盒10 次包装技术优势
1. 能有效的处理土壤样品中一些很难处理的组分如: 真细菌孢子(eubacterial spores)、内芽孢(endospores)、格兰仕阳性菌(gram positive bacteria)、酵母(yeast)、线虫(nematodes)、海藻(algea)、真菌(fungi)等。
2. 样品处理过程中使用的 MT Buffer和Sodium Phosphate Buffer可在整个提取过程中有效的保护核酸,并大限度的降低RNA污染。
3. 基于硅珠的纯化方法,可有效地去除腐植酸、多元酚等PCR抑制物
4. 纯化所得的DNA可直接用于PCR、酶切等后续实验之中。
5. 对腐植酸含量特别高的样品,附加额外的处理方法。