1. 匀浆处理:a.组织 将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。
b.单层培养细胞 直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞,每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml,用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定,不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。
c.细胞悬液 离心收集细胞,每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol,反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。
3.可选步骤:如样品中含有较多蛋白质,脂肪,多糖或胞外物质(肌肉,植物结节部分等)可于2-8℃10000×g离心10分钟,取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜,多糖,高分子量DNA,上清中含有RNA。处理脂肪组织时,上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2m,剧烈振荡15秒,室温放置3分钟。
6. 2-8℃10000×g离心15分钟。样品分为三层:底层为黄色有机相,上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中,水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。
7. 把水相转移到新管中,如要分离DNA和蛋白质可保留有机相,进一步操作见后。用异丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml异丙醇,室温放置10分钟。
8. 2-8℃10000×g离心10分钟,离心前看不出RNA沉淀,离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。
9. 用75℅乙醇洗涤RNA沉淀。每使用1ml TRIzol至少加1ml 75℅乙醇。2-8℃不超过7500×g离心5分钟,弃上清。
10.室温放置干燥或真空抽干RNA沉淀,大约晾5-10分钟即可.不要真空离心干燥,过于干燥会导致RNA的溶解性大大降低。加入25-200μl无RNase的水或0.5℅SDS,用枪头吸打几次,55-60℃放置10分钟使RNA溶解.如RNA用于酶切反应,勿使用SDS溶液。RNA也可用100℅的去离子甲酰胺溶解,-70℃保存。
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FORSKOLIN 绵马贯众素ABBA
骨骼肌细胞生长因子5mL包装ANDROGRAPANIN 刺甘草查尔酮
VASICINONE 大黄素-8-β-D-吡喃葡萄糖苷
VASICINE HCL 绵马酸ABA
WITHANOSIDE IV 异莲心碱
WITHANOSIDE V 甘草查尔酮A
TRIGONELLINE HYDROCHLORIDE 甘草查尔酮B
ISOFORSKOLIN 甘草查尔酮C
EUPALITIN 莲心碱高氯酸盐
LDopa 莲心碱
1,3,6Trigalloyl βDglucose 芳樟醇
1,9dideoxyforskolin 木兰花碱
11Ketoβboswellic acid 甲基橙皮苷
14deoxy11,12 didehydro andrographolide 甲基原薯蓣皂苷
18αGlycyrrhetinic acid 丹参酚酸B甲酯
18β Glycyrrhetinic acid 桑辛素
1Octacosanol 桑皮苷A
1Octacosanol 桑皮苷C
33'diOmethyl ellagic acid4' OβDxylopyranoside 丁烯基苯酞
3OAcetylboswellic acid (α+β) 甲基莲心碱
3OMethylellagic acid 新穿心莲内酯
7OMethylwogonin 氧化芍药苷
Allylpyrocatechol 茯苓酸
Allylpyrocatechol 3,4diacetate 伪金丝桃素
Anethole 大黄酸-8-O-β-D-葡萄糖苷
ARJUNGENIN 桑根酮C
BacosideA (Mixture of BacosideA3, BacopasideII, Jujubogenin isomer of bacopasaponin C & Bacopasaponin C) 洋川芎内酯A
ANGELICIN (BAKUCHICIN) 洋川芎内酯H
Boswellic acid (α+β) 洋川芎内酯I
骨骼肌细胞生长因子5mL包装技术优势
1. 能有效的处理土壤样品中一些很难处理的组分如: 真细菌孢子(eubacterial spores)、内芽孢(endospores)、格兰仕阳性菌(gram positive bacteria)、酵母(yeast)、线虫(nematodes)、海藻(algea)、真菌(fungi)等。
2. 样品处理过程中使用的 MT Buffer和Sodium Phosphate Buffer可在整个提取过程中有效的保护核酸,并大限度的降低RNA污染。
3. 基于硅珠的纯化方法,可有效地去除腐植酸、多元酚等PCR抑制物
4. 纯化所得的DNA可直接用于PCR、酶切等后续实验之中。
5. 对腐植酸含量特别高的样品,附加额外的处理方法。