1. 匀浆处理:a.组织 将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。
b.单层培养细胞 直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞,每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml,用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定,不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。
c.细胞悬液 离心收集细胞,每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol,反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。
3.可选步骤:如样品中含有较多蛋白质,脂肪,多糖或胞外物质(肌肉,植物结节部分等)可于2-8℃10000×g离心10分钟,取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜,多糖,高分子量DNA,上清中含有RNA。处理脂肪组织时,上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2m,剧烈振荡15秒,室温放置3分钟。
6. 2-8℃10000×g离心15分钟。样品分为三层:底层为黄色有机相,上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中,水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。
7. 把水相转移到新管中,如要分离DNA和蛋白质可保留有机相,进一步操作见后。用异丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml异丙醇,室温放置10分钟。
8. 2-8℃10000×g离心10分钟,离心前看不出RNA沉淀,离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。
9. 用75℅乙醇洗涤RNA沉淀。每使用1ml TRIzol至少加1ml 75℅乙醇。2-8℃不超过7500×g离心5分钟,弃上清。
10.室温放置干燥或真空抽干RNA沉淀,大约晾5-10分钟即可.不要真空离心干燥,过于干燥会导致RNA的溶解性大大降低。加入25-200μl无RNase的水或0.5℅SDS,用枪头吸打几次,55-60℃放置10分钟使RNA溶解.如RNA用于酶切反应,勿使用SDS溶液。RNA也可用100℅的去离子甲酰胺溶解,-70℃保存。
shgoy-1539猪雌二醇受体(ER)ELISA Kit,48T/96T C5a(Mouse Complement fragment 5a)ELISA Kit 小鼠补体片断5a
shgoy-1540大鼠雌二醇受体(ER)ELISA Kit,48T/96T bFGF ELISA Kit 大鼠碱性成纤维生长因子
shgoy-1541人补体蛋白4(C4)ELISA Kit,48T/96T C3a(Mouse Complement fragment 3a)ELISA Kit 小鼠补体片断3a
shgoy-1542小鼠补体蛋白4(C4)ELISA Kit,48T/96T PCA-1/Yo(Human purkinje cell autoantibody) ELISA Kit 人抗浦肯野细胞抗体/抗Yo抗体
shgoy-1543大鼠补体蛋白4(C4)ELISA Kit,48T/96T Human anti-Sa-antibody ELISA Kit 人抗Sa抗体
shgoy-1544兔子补体蛋白4(C4)ELISA Kit,48T/96T 17-OHP(Mouse 17-Hydroxyprogesterone)ELISA Kit 小鼠17羟孕酮
shgoy-1545鲑鱼补体蛋白4(C4)ELISA Kit,48T/96T MIP-5 ELISA Kit 大鼠巨噬细胞炎症蛋白5
shgoy-1546犬肾素(Renin)ELISA Kit,48T/96T sICAM-1 ELISA Kit 大鼠可溶性细胞间粘附分子1
shgoy-1547人肾素(Renin)ELISA Kit,48T/96T FS(Mouse Follistatin)ELISA Kit 小鼠卵泡抑素
shgoy-1548小鼠肾素(Renin)ELISA Kit,48T/96T ANNA-2/Ri(Human neuronal nuclear autoantibody) ELISA Kit 人抗神经元核抗体2型/抗Ri抗体
shgoy-1549大鼠肾素(Renin)ELISA Kit,48T/96T hnRNP/RA33(Human heterogeneous nuclear ribonucleoprotein compies/anti-RA33-antibody) ELISA Kit 人异质型核糖核蛋白复合物/抗RA33抗体
shgoy-1550兔肾素(Renin)ELISA Kit,48T/96T HD(Mouse Histone Deacetylase)ELISA Kit 小鼠组织蛋白去乙酰化酶
shgoy-1551人肺表面活性物质相关蛋白A(SP-A)ELISA Kit,48T/96T sVCAM-1 ELISA Kit 大鼠可溶性血管细胞粘附分子1
shgoy-1552小鼠肺表面活性物质相关蛋白A(SP-A)ELISA Kit,48T/96T E3(Mouse Estriol)ELISA Kit 小鼠雌三醇
shgoy-1553猪肺表面活性物质相关蛋白A(SP-A)ELISA Kit,48T/96T anti-Q-Ab(Human anti-Q fever antibody) ELISA Kit 人抗Q热抗体
shgoy-1554大鼠肺表面活性物质相关蛋白A(SP-A)ELISA Kit,48T/96T IgA ELISA Kit 大鼠免疫球蛋白A
shgoy-1555人15脂加氧酶(15-LO/LOX)ELISA Kit,48T/96T PM-Scl/PM-1(Human polymyositis-sclerosis antibody) ELISA Kit 人抗多发性肌炎硬皮病抗体
shgoy-1556小鼠15脂加氧酶(15-LO/LOX)ELISA Kit,48T/96T IgE ELISA Kit 大鼠免疫球蛋白E
shgoy-1557大鼠15脂加氧酶(15-LO/LOX)ELISA Kit,48T/96T ASD(Mouse Androstenedione)ELISA Kit 小鼠雄烯二酮
Andrographolide穿心莲乙素
Stemonidine次百部碱
Eleutheroside B刺五加苷B
Eleutheroside D刺五加苷D
acanthopanax senticosides B刺五加皂苷B
Soyasaponin Aa大豆皂苷AA
Soyasaponin Bb大豆皂苷BB
Pectolinarin大蓟苷
Mollugin大叶茜草素
Acridine Orange(AO)100mg包装Salvianolic acid A丹参酚酸A
Tanshi I丹参酮Ⅰ
Tanshi II A丹参酮ⅡA
Salvianolic acid C丹酚酸C
Indirubin靛玉红
Eugenol丁香酚
Syringaresinol-di-O-glucoside丁香树脂醇双葡萄糖苷
Syringic acid丁香酸
Syringic acid3,5-二甲氧基-4-羟基苯甲酸
Scopolamine butylbromide丁溴东莨菪碱
Hyoscin东莨菪碱
Scopoletin东莨菪内酯
Gaultherin冬绿苷
Hiliedum豆腐果素
Helicianeoide A豆腐果新苷A
Helicianeoide B豆腐果新苷B
Cardamonin豆蔻明
Farrerol杜鹃素
Acridine Orange(AO)100mg包装技术优势
1. 能有效的处理土壤样品中一些很难处理的组分如: 真细菌孢子(eubacterial spores)、内芽孢(endospores)、格兰仕阳性菌(gram positive bacteria)、酵母(yeast)、线虫(nematodes)、海藻(algea)、真菌(fungi)等。
2. 样品处理过程中使用的 MT Buffer和Sodium Phosphate Buffer可在整个提取过程中有效的保护核酸,并大限度的降低RNA污染。
3. 基于硅珠的纯化方法,可有效地去除腐植酸、多元酚等PCR抑制物
4. 纯化所得的DNA可直接用于PCR、酶切等后续实验之中。
5. 对腐植酸含量特别高的样品,附加额外的处理方法。