1. 匀浆处理:a.组织 将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。
b.单层培养细胞 直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞,每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml,用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定,不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。
c.细胞悬液 离心收集细胞,每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol,反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。
3.可选步骤:如样品中含有较多蛋白质,脂肪,多糖或胞外物质(肌肉,植物结节部分等)可于2-8℃10000×g离心10分钟,取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜,多糖,高分子量DNA,上清中含有RNA。处理脂肪组织时,上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2m,剧烈振荡15秒,室温放置3分钟。
6. 2-8℃10000×g离心15分钟。样品分为三层:底层为黄色有机相,上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中,水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。
7. 把水相转移到新管中,如要分离DNA和蛋白质可保留有机相,进一步操作见后。用异丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml异丙醇,室温放置10分钟。
8. 2-8℃10000×g离心10分钟,离心前看不出RNA沉淀,离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。
9. 用75℅乙醇洗涤RNA沉淀。每使用1ml TRIzol至少加1ml 75℅乙醇。2-8℃不超过7500×g离心5分钟,弃上清。
10.室温放置干燥或真空抽干RNA沉淀,大约晾5-10分钟即可.不要真空离心干燥,过于干燥会导致RNA的溶解性大大降低。加入25-200μl无RNase的水或0.5℅SDS,用枪头吸打几次,55-60℃放置10分钟使RNA溶解.如RNA用于酶切反应,勿使用SDS溶液。RNA也可用100℅的去离子甲酰胺溶解,-70℃保存。
shgoy-1380小鼠糖原磷酸化酶同工酶MM(GP-MM)ELISA Kit,48T/96T Nogo-A Ab(Human anti-Nogo-A antibody) ELISA Kit 人NOGO-A抗体
shgoy-1381大鼠糖原磷酸化酶同工酶MM(GP-MM)ELISA Kit,48T/96T tTG-IgA(Human Anti-tissue transglutaminase IgA) ELISA kit 人抗组织转谷氨酰胺酶抗体IgA
shgoy-1382人糖原磷酸化酶同工酶II(GP-II)ELISA Kit,48T/96T CA724(Mouse CA724) ELISA Kit 小鼠肿瘤标志物
shgoy-1383小鼠糖原磷酸化酶同工酶II(GP-II)ELISA Kit,48T/96T MHC I /AgB I /H-1 I ELISA Kit 大鼠主要组织相容性复合体Ⅰ类
shgoy-1384大鼠糖原磷酸化酶同工酶II(GP-II)ELISA Kit,48T/96T GATA4 ELISA Kit 大鼠GATA结合蛋白4
shgoy-1385人叠氮胸苷(AZT)ELISA Kit,48T/96T F II (Mouse coagulation factor II ) ELISA Kit 小鼠凝血因子Ⅱ
shgoy-1386小鼠叠氮胸苷(AZT)ELISA Kit,48T/96T Surv(Human anti-Survivin antibody) ELISA Kit 人抗存活素抗体/生存蛋白
shgoy-1387大鼠叠氮胸苷(AZT)ELISA Kit,48T/96T IP-10/CXCL10 ELISA Kit 大鼠干扰素诱导蛋白10
shgoy-1388人多巴胺(DA)ELISA Kit,48T/96T ET(Mouse endotoxin) ELISA Kit 小鼠内毒素
shgoy-1389小鼠多巴胺(DA)ELISA Kit,48T/96T GM-CSF Ab(Human anti-Granulocyte-Macrophage Colony Stimulating Factor antibody) ELISA Kit 人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子抗体
shgoy-1390大鼠多巴胺(DA)ELISA Kit,48T/96T ANP(Mouse Atrial Natriuretic Peptide) ELISA Kit 小鼠心钠肽
shgoy-1391人促甲状腺激素受体抗体(TSHR)ELISA Kit,48T/96T ENA-78/CXCL5 ELISA Kit 大鼠上皮中性粒细胞活化肽78
shgoy-1392小鼠高灵敏度促甲状腺激素(U-TSH)ELISA Kit,48T/96T TTN(Human Anti-titin Antibody) ELISA Kit 人抗肌联蛋白抗体
shgoy-1393大鼠高灵敏度促甲状腺激素(U-TSH)ELISA Kit,48T/96T AT- III ELISA Kit 大鼠抗凝血酶Ⅲ抗体
shgoy-1394人高敏甲状腺素(u-T4)ELISA Kit,48T/96T PPAR- Gamma(Mouse Peroxisome Proliferator-activated receptor Gamma) ELISA Kit 小鼠过氧化物酶体增殖因子活化受体γ
shgoy-1395小鼠高敏甲状腺素(u-T4)ELISA Kit,48T/96T PsmAb(Human anti-presynaptic membrane antibody) ELISA Kit 人抗突触前膜抗体
shgoy-1396大鼠高敏甲状腺素(u-T4)ELISA Kit,48T/96T AT2R-Ab(Human Angiotensin II Receptor 2 antibody) ELISA Kit 人血管紧张素Ⅱ受体2抗体
shgoy-1397犬主要组织相容性复合体(MHC/DLA)ELISA Kit,48T/96T TSST-1(Mouse toxic shock syndrome toxin) ELISA Kit 小鼠毒性休克综合征毒素1
shgoy-1398豚鼠主要组织相容性复合体(MHC/GPLA)ELISA Kit,48T/96T NP-Y ELISA Kit 大鼠神经肽Y
TBHQEndo培养基
Aminophylline hydrateRVS肉汤
OctadecylamineMKTTN肉汤
NIPAM赖氨酸铁琼脂
Glycyrrhizic acid ammonium salt改良MSRV培养基
RheinSCCRAM肉汤
Oleanolic acidBPL琼脂
Cesium hydroxide monohydrateBPLS琼脂
Cyanine 3-NHS Ester12x50nm包装Acetylene tetrabromide改良BPLS琼脂
p-BenzoquiMIO培养基
N-NitrosodiethylamineXLT4琼脂
HecogeninD,E中和肉汤
1-DodecanethiolD,E中和琼脂
Poly(acrylic acid)M-肉汤
1,3-Dihydroxynaphthalene煌绿黄胺嘧啶琼脂
HFIPBGS琼脂
Iodine trichlorideXLD培养基
Chloroiodide去氧胆酸盐枸橼酸盐琼脂
1-Bromodecane去氧胆酸盐枸橼酸盐乳糖蔗糖琼脂
6-Bromohexanoic acidV-J琼脂
Tetrapropylammonium bromideNAC琼脂培养基
Sodium methoxide马铃薯葡萄糖琼脂
Allyl disulfide(酚红)亮绿琼脂培养基
5-Aminovaleric acid梭菌增菌培养基
3-Hydroxybutyric acid哥伦比亚琼脂培养基
Cyanine 3-NHS Ester12x50nm包装技术优势
1. 能有效的处理土壤样品中一些很难处理的组分如: 真细菌孢子(eubacterial spores)、内芽孢(endospores)、格兰仕阳性菌(gram positive bacteria)、酵母(yeast)、线虫(nematodes)、海藻(algea)、真菌(fungi)等。
2. 样品处理过程中使用的 MT Buffer和Sodium Phosphate Buffer可在整个提取过程中有效的保护核酸,并大限度的降低RNA污染。
3. 基于硅珠的纯化方法,可有效地去除腐植酸、多元酚等PCR抑制物
4. 纯化所得的DNA可直接用于PCR、酶切等后续实验之中。
5. 对腐植酸含量特别高的样品,附加额外的处理方法。