1. 匀浆处理:a.组织 将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。
b.单层培养细胞 直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞,每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml,用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定,不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。
c.细胞悬液 离心收集细胞,每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol,反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。
3.可选步骤:如样品中含有较多蛋白质,脂肪,多糖或胞外物质(肌肉,植物结节部分等)可于2-8℃10000×g离心10分钟,取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜,多糖,高分子量DNA,上清中含有RNA。处理脂肪组织时,上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2m,剧烈振荡15秒,室温放置3分钟。
6. 2-8℃10000×g离心15分钟。样品分为三层:底层为黄色有机相,上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中,水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。
7. 把水相转移到新管中,如要分离DNA和蛋白质可保留有机相,进一步操作见后。用异丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml异丙醇,室温放置10分钟。
8. 2-8℃10000×g离心10分钟,离心前看不出RNA沉淀,离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。
9. 用75℅乙醇洗涤RNA沉淀。每使用1ml TRIzol至少加1ml 75℅乙醇。2-8℃不超过7500×g离心5分钟,弃上清。
10.室温放置干燥或真空抽干RNA沉淀,大约晾5-10分钟即可.不要真空离心干燥,过于干燥会导致RNA的溶解性大大降低。加入25-200μl无RNase的水或0.5℅SDS,用枪头吸打几次,55-60℃放置10分钟使RNA溶解.如RNA用于酶切反应,勿使用SDS溶液。RNA也可用100℅的去离子甲酰胺溶解,-70℃保存。
shgoy-380小鼠抑瘤素M(OSM)ELISA Kit,48T/96T Plant Vitamin B6,VB6 ELISA Kit 植物维生素B6
shgoy-381大鼠抑瘤素M(OSM)ELISA Kit,48T/96T MMP-1 (Rabbit matrix metalloproteinase 1) ELISA Kit 兔基质金属蛋白酶1
shgoy-382兔抑瘤素M(OSM)ELISA Kit,48T/96T BMP-2(Mouse Bone morphogenetic protein 2) ELISA Kit 小鼠骨成型蛋白2
shgoy-383人血血小板衍生生长因子可溶性受体α(PDGFsR-α)HSP47 ELISA Kit 大鼠热休克蛋白47
shgoy-384小鼠血小板衍生生长因子可溶性受体α(PDGFsR-α)Plant 25-Dihydroxy vitamin D3,HVD3 ELISA Kit 植物25羟基维生素D3
shgoy-385大鼠血小板衍生生长因子可溶性受体α(PDGFsR-α)8-epi-PGF2 Alpha (Rabbit 8-epi-prostaglandin F2alpha) ELISA Kit 兔8-异构前列腺素
shgoy-386人血血小板衍生生长因子AB(PDGF-AB)ELISA Kit,48T/96T BMP-4(Mouse Bone morphogenetic protein 4) ELISA Kit 小鼠骨成型蛋白4
shgoy-387小鼠血小板衍生生长因子AB(PDGF-AB)ELISA Kit,48T/96T GC ELISA Kit 大鼠内源性糖皮质激素
shgoy-388大鼠血小板衍生生长因子AB(PDGF-AB)ELISA Kit,48T/96T IAP(Human inhibitor of apoptosis) ELISA Kit 人细胞凋亡抑制因子
shgoy-389鸡烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)ELISA Kit,48T/96T CS ELISA Kit 大鼠柠檬酸合酶
shgoy-390人烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)ELISA Kit,48T/96T PF-4/CXCL4 (Rabbit Platelet Factor 4) ELISA Kit 兔子血小板因子4
shgoy-391小鼠烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)ELISA Kit,48T/96T IGFBP-6(Mouse Insulin-like growth factor binding protein 6) ELISA kit 小鼠胰岛素样生长因子结合蛋白6
shgoy-392大鼠烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)ELISA Kit,48T/96T Plant Human Vitamin C,VC ELISA Kit 植物维生素C
shgoy-393人胎盘生长因子(PLGF)ELISA Kit,48T/96T CSF(Human colony-stimulating factor) ELISA Kit 人集落刺激因子
shgoy-394小鼠胎盘生长因子(PLGF)ELISA Kit,48T/96T MIGF/CXCL9(Human monocyte interferon gamma inducing factor) ELISA Kit 人γ干扰素诱导单核细胞因子
shgoy-395大鼠胎盘生长因子(PLGF)ELISA Kit,48T/96T MIP-1 Delta(Mouse Macrophage Inflammatory Protein 1 Delta) ELISA kit 小鼠巨噬细胞炎性蛋白1δ
shgoy-396人P选择素(P-Selectin/CD62P)ELISA Kit,48T/96T L-LDH ELISA Kit 大鼠L-鼠乳酸脱氢酶
shgoy-397小鼠P选择素(P-Selectin/CD62P)ELISA Kit,48T/96T Beta-TG (Rabbit Beta-Thromboglobulin) ELISA Kit 兔子β血小板球蛋白/β血栓环蛋白
shgoy-398大鼠P选择素(P-Selectin/CD62P)ELISA Kit,48T/96T Alpha-bungarotoxin, Alpha-BGT ELISA Kit α-银环蛇毒素
shgoy-399人正常T细胞表达和分泌因子(RANTES)ELISA Kit,48T/96T Bacillus thuringiensis,BT ELISA Kit 苏云金芽孢杆菌蛋白
VAZO671-(3-二甲基胺丙基)-3-乙基碳二亚胺
VAZO521-乙基-3-(3-二甲氨丙基)碳二亚胺盐酸盐
AIBI酚酞单磷酸环己胺盐
AIP盐酸萘乙二胺
ACVA聚丙烯酰胺
AIBME苯甲酰胺
Azodicarbonamide聚乙烯亚胺
Span 20对甲苯胺
Span 40对甲苯胺盐酸盐
Span 60苯胺盐酸盐
Span 80联苯胺
Span 85联苯胺盐酸盐
Catalase( 抗氧化酶 )200mg包装BBOT乙二胺盐酸盐
BOP Reagent六亚甲基四胺
HDBAC盐酸三乙醇胺
Benzyldodecyldimethylammonium bromide乙酰胺
Benzethonium chloride乙酰基乙酰苯胺
SB3-12N-苯甲酰-N-苯基羟胺
Octyltrimethylammonium chloride2-氯乙酰胺
SB3-84-氯乙酰苯胺
SB3-10碳酸环己胺
Benzyltrimethylammonium bromide1,1-二蒽醌亚胺
3-(2-Aminoethylamino)propyldimethoxymethylsilane2,6-二氯醌-4-氯亚胺
Catalase( 抗氧化酶 )200mg包装技术优势
1. 能有效的处理土壤样品中一些很难处理的组分如: 真细菌孢子(eubacterial spores)、内芽孢(endospores)、格兰仕阳性菌(gram positive bacteria)、酵母(yeast)、线虫(nematodes)、海藻(algea)、真菌(fungi)等。
2. 样品处理过程中使用的 MT Buffer和Sodium Phosphate Buffer可在整个提取过程中有效的保护核酸,并大限度的降低RNA污染。
3. 基于硅珠的纯化方法,可有效地去除腐植酸、多元酚等PCR抑制物
4. 纯化所得的DNA可直接用于PCR、酶切等后续实验之中。
5. 对腐植酸含量特别高的样品,附加额外的处理方法。