1. 匀浆处理:a.组织 将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。
b.单层培养细胞 直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞,每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml,用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定,不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。
c.细胞悬液 离心收集细胞,每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol,反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。
3.可选步骤:如样品中含有较多蛋白质,脂肪,多糖或胞外物质(肌肉,植物结节部分等)可于2-8℃10000×g离心10分钟,取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜,多糖,高分子量DNA,上清中含有RNA。处理脂肪组织时,上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2m,剧烈振荡15秒,室温放置3分钟。
6. 2-8℃10000×g离心15分钟。样品分为三层:底层为黄色有机相,上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中,水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。
7. 把水相转移到新管中,如要分离DNA和蛋白质可保留有机相,进一步操作见后。用异丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml异丙醇,室温放置10分钟。
8. 2-8℃10000×g离心10分钟,离心前看不出RNA沉淀,离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。
9. 用75℅乙醇洗涤RNA沉淀。每使用1ml TRIzol至少加1ml 75℅乙醇。2-8℃不超过7500×g离心5分钟,弃上清。
10.室温放置干燥或真空抽干RNA沉淀,大约晾5-10分钟即可.不要真空离心干燥,过于干燥会导致RNA的溶解性大大降低。加入25-200μl无RNase的水或0.5℅SDS,用枪头吸打几次,55-60℃放置10分钟使RNA溶解.如RNA用于酶切反应,勿使用SDS溶液。RNA也可用100℅的去离子甲酰胺溶解,-70℃保存。
shgoy-7129知母皂苷BⅡM28164anemarsaponin B97%
shgoy-7130酯蟾毒配基M28165Resibufogenin≥98%
shgoy-7131重楼皂苷IM28166Chonglou saponin I≥94%
shgoy-7132重楼皂苷IIM28167Polyphyllin II92%
shgoy-7133竹叶香附素AM28168Raddeanin(Anemodeanin) A98%
shgoy-7134梓醇M28169Catalpol≥98%
shgoy-7135紫草酸M28170 lithospermic acid96%
shgoy-7136紫丁香苷M28171Syringin95%
shgoy-7137紫花前胡素M28172DECURSIN≥97%
shgoy-7138紫堇灵M28173Corynoline≥98%
shgoy-7139紫杉醇M28174Paclitaxel≥98%
shgoy-7140紫杉叶素M28175(+)-Taxifolin≥95%
shgoy-7141紫菀酮M28176Shio97%
shgoy-7142紫云英苷M28177ASTRAGALIN≥98%
shgoy-7143棕榈酸M28178Palmic acid≥97%
Lovastatin(HMG-CoA Reductase 抑制剂 )10mg包装shgoy-7144"总银杏酸
(C13:0,C15:1,C17:1)"M28179"Ginkgolic Acids
(C13:0,C15:1,C17:1)"≥95%
shgoy-7145"总银杏酸
(C13:0,C15:1,C17:2,C15:0,C17:1)"M28180"Ginkgolic Acids
(C13:0,C15:1,C17:2,C15:0,C17:1)"≥99%
shgoy-7146醉椒素M28181Kavain≥99%
shgoy-7147左旋紫草素M28182Shikonin≥95%
Maltose间甲基红
Maltose monohydrate邻菲啰啉
Xylan邻菲啰啉盐酸盐
Chitosan邻硝基苯酚
Chitosan对硝基苯酚
Chitin邻硝基苯胺
Sorbic acid对硝基苯胺
D-(+)-Raffinose pentahydrate间硝基苯胺
D-Ribose玫瑰红三羧酸铵
2-Deoxy-D-Ribose玫瑰红6G
2-Deoxy-D-glucose玫红酸
D-Mannose玫瑰红酸钠
D-Mannitol5-硝基邻菲啰啉
L(+)-Rhamnose monohydrate邻苯二酚紫
Inositol活性碳
L-(+)-Lactic acid比布里希猩红
DL-Lactic acid间甲酚紫
L-Malic acid二苯胺磺酸钠
DL-Malic acid滂胺天蓝
DTT粘蛋白胭脂红
DTE甲基蓝
Pectin7-氨基-4-甲基香豆素
Polygalacturonic acid sodium salt酸性偶氮红
Polygalacturonic acid隐色结晶紫
IPTG隐色孔雀石绿
Methyl α-D-mannopyranoside石炭酸复红
MUG亮蓝
4-MUP吖啶红
MEGA-10焦油紫
Decyl-β-D-glucopyranoside鲁米诺
MEGA-92,2′-联氨-双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)二胺盐
OMEGAABTS液体底物
MetrizamideABTS底物片剂
Meglumine天青石蓝
Lovastatin(HMG-CoA Reductase 抑制剂 )10mg包装技术优势
1. 能有效的处理土壤样品中一些很难处理的组分如: 真细菌孢子(eubacterial spores)、内芽孢(endospores)、格兰仕阳性菌(gram positive bacteria)、酵母(yeast)、线虫(nematodes)、海藻(algea)、真菌(fungi)等。
2. 样品处理过程中使用的 MT Buffer和Sodium Phosphate Buffer可在整个提取过程中有效的保护核酸,并大限度的降低RNA污染。
3. 基于硅珠的纯化方法,可有效地去除腐植酸、多元酚等PCR抑制物
4. 纯化所得的DNA可直接用于PCR、酶切等后续实验之中。
5. 对腐植酸含量特别高的样品,附加额外的处理方法。