1. 匀浆处理:a.组织 将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。
b.单层培养细胞 直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞,每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml,用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定,不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。
c.细胞悬液 离心收集细胞,每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol,反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。
3.可选步骤:如样品中含有较多蛋白质,脂肪,多糖或胞外物质(肌肉,植物结节部分等)可于2-8℃10000×g离心10分钟,取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜,多糖,高分子量DNA,上清中含有RNA。处理脂肪组织时,上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2m,剧烈振荡15秒,室温放置3分钟。
6. 2-8℃10000×g离心15分钟。样品分为三层:底层为黄色有机相,上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中,水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。
7. 把水相转移到新管中,如要分离DNA和蛋白质可保留有机相,进一步操作见后。用异丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml异丙醇,室温放置10分钟。
8. 2-8℃10000×g离心10分钟,离心前看不出RNA沉淀,离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。
9. 用75℅乙醇洗涤RNA沉淀。每使用1ml TRIzol至少加1ml 75℅乙醇。2-8℃不超过7500×g离心5分钟,弃上清。
10.室温放置干燥或真空抽干RNA沉淀,大约晾5-10分钟即可.不要真空离心干燥,过于干燥会导致RNA的溶解性大大降低。加入25-200μl无RNase的水或0.5℅SDS,用枪头吸打几次,55-60℃放置10分钟使RNA溶解.如RNA用于酶切反应,勿使用SDS溶液。RNA也可用100℅的去离子甲酰胺溶解,-70℃保存。
shgoy-6961水晶兰苷M27996Monotropein≥96%
shgoy-6962水杨苷M27997Salicin≥98%
shgoy-6963斯皮诺素M27998Spinosin≥98%
shgoy-6964松果菊苷M27999Echinacoside≥95%
shgoy-6965松萝酸M28000Usinic acid≥98%
shgoy-6966松脂醇二葡萄糖苷M28001Pinoresinol Diglucoside≥98%
shgoy-6967酸枣仁皂苷AM28002Jujuboside A≥98%
shgoy-6968酸枣仁皂苷BM28003Jujuboside B≥98%
shgoy-6969穗花牡荆苷M28004agnuside≥98%
shgoy-6970穗花杉双黄酮M28005Amentoflavone97%
shgoy-6971他克莫司FK-506M28006Tacrolimus≥98%
shgoy-6972塔拉萨敏M28007talatisamine≥97%
shgoy-6973苔黑酚龙胆二糖苷M28008Orcinol gentiobioside≥98%
shgoy-6974苔黑酚葡萄糖苷M28009Orcinol glucosid≥98%
shgoy-6975桃叶珊瑚苷M28010Aucubin≥98%
shgoy-6976特女贞苷M28011Specnuezhenide≥98%
shgoy-6977天麻素M28012Gastrodin≥98%
shgoy-6978天名精内酯酮M28013Carabrone≥98%
shgoy-6979甜菜碱M28014abromine≥98%
shgoy-6980甜橙黄酮M28015Sinensetin96%
shgoy-6981头花千金藤碱M28016Stephanotis98%
shgoy-6982土贝母苷甲M28017Tubeimoside A≥95%
Triacontanol柠檬酸钠
Maleic HydrazideD-葡萄糖酸钠
Maleic hydrazide potassium salt2-氯-4-硝基苯-α-L-岩藻糖苷
Diphenylcartazide山梨酸钾
Betaine HC1DL-苹果酸钙
Betaine4-甲基伞形酮酰-β-D-吡喃糖苷
Colchicine4-甲基伞形酮酰-α-D-吡喃糖苷
Demecolcine4-甲基伞形酮酰-β-D-吡喃葡糖酸苷
Indomethacin四乙酰核糖
AdenosineD-葡萄糖醛酸内酯
CAMP甜菊糖
CAMP,NaL-乳酸钾
5´-AMP柠檬酸锌
5'-AMP,2Na葡萄糖酸亚铁
5'-ADP,Na2葡萄糖酸镁
5'-ATP,Na2葡萄糖酸铜
Cytosine葡萄糖酸钾
Cytidine脱氢乙酸
5′- CMPD-泛醇
5′-CMP,2Na麦芽糖醇
NS-398(COX-2 抑制剂 )1mg包装5′-CDP,Na低聚果糖
5′-CDP,2Na低聚异麦芽糖
5′-CTP,2Na三氯蔗糖
5′-CTP,3Na抗坏血酸-6-棕榈酸酯
5′-CTP,4Na低聚木糖
Thymine低聚半乳糖
Uracil赤藓糖醇
UridineL(-)岩藻糖
NS-398(COX-2 抑制剂 )1mg包装技术优势
1. 能有效的处理土壤样品中一些很难处理的组分如: 真细菌孢子(eubacterial spores)、内芽孢(endospores)、格兰仕阳性菌(gram positive bacteria)、酵母(yeast)、线虫(nematodes)、海藻(algea)、真菌(fungi)等。
2. 样品处理过程中使用的 MT Buffer和Sodium Phosphate Buffer可在整个提取过程中有效的保护核酸,并大限度的降低RNA污染。
3. 基于硅珠的纯化方法,可有效地去除腐植酸、多元酚等PCR抑制物
4. 纯化所得的DNA可直接用于PCR、酶切等后续实验之中。
5. 对腐植酸含量特别高的样品,附加额外的处理方法。