1. 匀浆处理:a.组织 将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。
b.单层培养细胞 直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞,每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml,用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定,不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。
c.细胞悬液 离心收集细胞,每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol,反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。
3.可选步骤:如样品中含有较多蛋白质,脂肪,多糖或胞外物质(肌肉,植物结节部分等)可于2-8℃10000×g离心10分钟,取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜,多糖,高分子量DNA,上清中含有RNA。处理脂肪组织时,上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2m,剧烈振荡15秒,室温放置3分钟。
6. 2-8℃10000×g离心15分钟。样品分为三层:底层为黄色有机相,上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中,水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。
7. 把水相转移到新管中,如要分离DNA和蛋白质可保留有机相,进一步操作见后。用异丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml异丙醇,室温放置10分钟。
8. 2-8℃10000×g离心10分钟,离心前看不出RNA沉淀,离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。
9. 用75℅乙醇洗涤RNA沉淀。每使用1ml TRIzol至少加1ml 75℅乙醇。2-8℃不超过7500×g离心5分钟,弃上清。
10.室温放置干燥或真空抽干RNA沉淀,大约晾5-10分钟即可.不要真空离心干燥,过于干燥会导致RNA的溶解性大大降低。加入25-200μl无RNase的水或0.5℅SDS,用枪头吸打几次,55-60℃放置10分钟使RNA溶解.如RNA用于酶切反应,勿使用SDS溶液。RNA也可用100℅的去离子甲酰胺溶解,-70℃保存。
shgoy-6882羟基酪醇M27917hydroxytyrosol≥97%
shgoy-6883茄尼醇M27918Solanesol98%
shgoy-6884芹菜素M27919Apigenin≥98%
shgoy-6885秦皮苷M27920Fraxin≥98%
shgoy-6886秦皮甲素M27921Aesculin≥98%
shgoy-6887秦皮素M27922Fraxetin≥98%
shgoy-6888秦皮乙素M27923Aesculetin≥98%
shgoy-6889青蒿琥酯M27924Artesunate≥98%
shgoy-6890青藤碱M27925Sinomenine≥98%
shgoy-6891氢溴东莨菪碱M27926Scopolamine Hydrobromide97%
shgoy-6892氢溴酸高乌甲素M27927LAPPACONITINE HYDROBROMIDE98%
shgoy-6893秋水仙碱M27928Colchicine≥97%
shgoy-6894去甲氧基姜黄素M27929Demethoxycurcumin≥98%
shgoy-6895去甲异波尔定M27930Norisoboldine≥98%
shgoy-6896去氢二异丁香酚M27931Dehydrodiisoeugenol≥95%
shgoy-6897去氢钩藤碱M27932Corynoxeine≥98%
shgoy-6898去氢荷包牡丹碱M27933Dehydrodicentrine95%
shgoy-6899去氢木香内酯M27934Dehydrocostus lactone≥98%
shgoy-6900去氧穿心莲内酯(穿心莲甲素,脱羟基穿心莲内酯,14-去氧穿心莲内酯)M27935Deoxyandrographolide???≥95%
shgoy-6901染料木苷M27936Genistin≥99%
shgoy-6902染料木素M27937Genistein≥99%
Cyclosporin A脱氧核糖核酸(鲑鱼精)
Ribostamycin Sulfate salt脱氧核糖核酸(小牛胸腺)
Piperacillin脱氧核糖核酸缓冲液
Dyclonine hydrochloride氯吡苯脲
Bialaphos毛地黄皂苷
LY-2372166-甲基香豆素
5-Fluorouracil7-羟基-4-甲基香豆素
Plicamycin缩节胺
Mycophenolic acid噻苯隆
Pifithrin-a(p53 抑制剂 )5mg包装Phleomycin from Streptomyces verticillus生根粉
Validamycin花宝1号
Econazole nitrate花宝2号
Metronidazole花宝3号
Norfloxacin花宝5号
Enrofloxacin反玉米素核苷
Florfenicol茶多酚
Sulfamerazine麦草畏
Sulfamethazine乙酸-α-萘酯
Sulfadiazine乙酸-β-萘酯
SD-Na黄素腺嘌呤二核苷酸二钠盐
Furazolidone支链淀粉
5-Fluorocytosine直链淀粉
Rosiglitazone maleate马铃薯淀粉
Novobiocin Sodium Salt马铃薯浸出粉
Pimaricin糊精
SMZα-环糊精
DOXβ-环糊精
Pifithrin-a(p53 抑制剂 )5mg包装技术优势
1. 能有效的处理土壤样品中一些很难处理的组分如: 真细菌孢子(eubacterial spores)、内芽孢(endospores)、格兰仕阳性菌(gram positive bacteria)、酵母(yeast)、线虫(nematodes)、海藻(algea)、真菌(fungi)等。
2. 样品处理过程中使用的 MT Buffer和Sodium Phosphate Buffer可在整个提取过程中有效的保护核酸,并大限度的降低RNA污染。
3. 基于硅珠的纯化方法,可有效地去除腐植酸、多元酚等PCR抑制物
4. 纯化所得的DNA可直接用于PCR、酶切等后续实验之中。
5. 对腐植酸含量特别高的样品,附加额外的处理方法。