1. 匀浆处理:a.组织 将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。
b.单层培养细胞 直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞,每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml,用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定,不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。
c.细胞悬液 离心收集细胞,每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol,反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。
3.可选步骤:如样品中含有较多蛋白质,脂肪,多糖或胞外物质(肌肉,植物结节部分等)可于2-8℃10000×g离心10分钟,取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜,多糖,高分子量DNA,上清中含有RNA。处理脂肪组织时,上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2m,剧烈振荡15秒,室温放置3分钟。
6. 2-8℃10000×g离心15分钟。样品分为三层:底层为黄色有机相,上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中,水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。
7. 把水相转移到新管中,如要分离DNA和蛋白质可保留有机相,进一步操作见后。用异丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml异丙醇,室温放置10分钟。
8. 2-8℃10000×g离心10分钟,离心前看不出RNA沉淀,离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。
9. 用75℅乙醇洗涤RNA沉淀。每使用1ml TRIzol至少加1ml 75℅乙醇。2-8℃不超过7500×g离心5分钟,弃上清。
10.室温放置干燥或真空抽干RNA沉淀,大约晾5-10分钟即可.不要真空离心干燥,过于干燥会导致RNA的溶解性大大降低。加入25-200μl无RNase的水或0.5℅SDS,用枪头吸打几次,55-60℃放置10分钟使RNA溶解.如RNA用于酶切反应,勿使用SDS溶液。RNA也可用100℅的去离子甲酰胺溶解,-70℃保存。
shgoy-6803连翘脂苷 AM27838Forsythiaside A≥95%
shgoy-6804连翘脂苷BM27839Forsythoside B≥98%
shgoy-6805莲心碱高氯酸盐M27840Liensinine perchlorate≥98%
shgoy-6806灵芝酸AM27841GANODERIC ACID A≥94%
shgoy-6807灵芝酸BM27842GANODERIC ACID B≥94%
shgoy-6808龙胆苦苷M27843Gentiopicroside≥98%
shgoy-6809龙血素AM27844Loureirin A95%
shgoy-6810龙血素BM27845Loureirin B≥98.0%
shgoy-6811芦丁M27846Rutin≥95%
shgoy-6812芦荟大黄素M27847Aloe-emodin≥95%
shgoy-6813芦荟苷AM27848Barbaloin A≥98%
shgoy-6814芦竹碱M27849Gramine≥98%
shgoy-6815鲁斯可皂苷元M27850RUSCOGENIN鉴别用(80%)
shgoy-6816绿原酸M27851Chlorogenic Acid≥98%
shgoy-6817氯化两面针碱M27852Nitidine Chloride≥98%
shgoy-6818氯化木兰花碱M27853magnoflorine chloride≥98% 96%
shgoy-6819罗汉果甜苷VM27854 Mogroside V≥98%
shgoy-6820罗汉果甜苷VIM27855 Mogroside VI≥98%
shgoy-6821罗汉果皂甙IVM27856Mogroside IⅤ≥98%
shgoy-6822洛塞琳M27857Rosarin≥95%
Low range protein MW marker丁酰肼
Protein little MW marker乙烯利
SDS-PAGE Molecular low weight markers for proteins3-吲哚乙酸
14.4-116kDa Protein Molecular weight Mark3-吲哚乙酸钠
Prestained Protein Molecular weight Mark3-吲哚丙酸
Precise Protein Molecular weight Mark3-吲哚丙酸钾
SDS-PAGE Molecular hight weight markers for proteins3-吲哚丁酸
Middle range protein MW marker3-吲哚丁酸钾
High range protein MW markerα-萘乙酸
RiboRuler Low range RNA Ladderα-萘乙酸钾
RiboRuler High range RNA Ladderβ-萘乙酸
PHA多效唑
SNP(NO 供体 )1g包装PHA-P马来酰肼
Cytochrome C马来酰肼钾盐
Histones,dried(Calf thymus)二苯基羰酰二肼
Histone甜菜碱盐酸盐
Histones nucleo from calf thymus无水甜菜碱
Histones H1 from calf thymus秋水仙胺
Mucin吲哚美辛
Mucin环磷酸腺苷
Protein protectant TY环磷酸腺苷钠盐
Protein A–Agarose5´-腺苷一磷酸
MT5-腺苷一磷酸二钠盐
Myoglobin from equine skeletal muscle5-腺苷二磷酸二钠盐
Protein A-Sepharose 4B, Fast Flow from Staphylococcus aureus5-腺苷三磷酸二钠盐
CIG胞嘧啶
β-Lactoglobulin胞苷
SNP(NO 供体 )1g包装技术优势
1. 能有效的处理土壤样品中一些很难处理的组分如: 真细菌孢子(eubacterial spores)、内芽孢(endospores)、格兰仕阳性菌(gram positive bacteria)、酵母(yeast)、线虫(nematodes)、海藻(algea)、真菌(fungi)等。
2. 样品处理过程中使用的 MT Buffer和Sodium Phosphate Buffer可在整个提取过程中有效的保护核酸,并大限度的降低RNA污染。
3. 基于硅珠的纯化方法,可有效地去除腐植酸、多元酚等PCR抑制物
4. 纯化所得的DNA可直接用于PCR、酶切等后续实验之中。
5. 对腐植酸含量特别高的样品,附加额外的处理方法。