1. 匀浆处理:a.组织 将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。
b.单层培养细胞 直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞,每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml,用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定,不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。
c.细胞悬液 离心收集细胞,每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol,反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。
3.可选步骤:如样品中含有较多蛋白质,脂肪,多糖或胞外物质(肌肉,植物结节部分等)可于2-8℃10000×g离心10分钟,取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜,多糖,高分子量DNA,上清中含有RNA。处理脂肪组织时,上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2m,剧烈振荡15秒,室温放置3分钟。
6. 2-8℃10000×g离心15分钟。样品分为三层:底层为黄色有机相,上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中,水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。
7. 把水相转移到新管中,如要分离DNA和蛋白质可保留有机相,进一步操作见后。用异丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml异丙醇,室温放置10分钟。
8. 2-8℃10000×g离心10分钟,离心前看不出RNA沉淀,离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。
9. 用75℅乙醇洗涤RNA沉淀。每使用1ml TRIzol至少加1ml 75℅乙醇。2-8℃不超过7500×g离心5分钟,弃上清。
10.室温放置干燥或真空抽干RNA沉淀,大约晾5-10分钟即可.不要真空离心干燥,过于干燥会导致RNA的溶解性大大降低。加入25-200μl无RNase的水或0.5℅SDS,用枪头吸打几次,55-60℃放置10分钟使RNA溶解.如RNA用于酶切反应,勿使用SDS溶液。RNA也可用100℅的去离子甲酰胺溶解,-70℃保存。
shgoy-6722和厚朴酚M27757Honokiol≥98%
shgoy-6723荷叶碱M27758Nuciferine98%
shgoy-6724黑介子苷M27759Sinigrin≥97%
shgoy-6725红景天苷M27760Salidroside≥98%
shgoy-6726红霉素AM27761Erythromycin A≥98%
shgoy-6727荭草苷M27762Orientin97%
shgoy-6728厚朴酚M27763Magnolol≥98%
shgoy-6729胡黄连苷-ⅢM27764Picroside-Ⅲ≥97%
shgoy-6730胡黄连苷IM27765Amphicoside Ⅰ≥98%
shgoy-6731胡黄连苷IIM27766Amphicoside II≥98%
shgoy-6732胡椒碱M27767Piperine≥98%
shgoy-6733胡麻属苷M27768Sesamoside≥99%
shgoy-6734葫芦素BM27769Cucurbitacin B≥98%
shgoy-6735槲皮苷M27770Quercitrin≥97%
shgoy-6736槲皮素M27771Quercetin≥98% ≥96%
shgoy-6737槲皮素-3-O-葡萄糖苷M27772Isoquercitrin≥98%
shgoy-6738虎杖苷M27773Polydatin≥98%
shgoy-6739华蟾酥毒基M27774Cinobufagin98%
shgoy-6740桦木醇M27775Betulinol≥95%
shgoy-6741槐定碱M27776sophoridine98%
shgoy-6742槐果碱M27777Sophocarpine≥98%
shgoy-6743槐角苷M27778Sophoricoside≥98%
Neuraminidase植物血球凝集素PHA-P
Polyphenol oxidase细胞色素C
PK组蛋白A(小牛胸腺)
Tyrosine decarboxylase组蛋白
UAO核酸组蛋白(小牛胸腺)
Urokinase组蛋白H1(小牛胸腺)
Fibrinolysin粘蛋白
Chitinase蛋白保护剂TY
HSD琼脂糖蛋白A
Sarcosine Oxidase金属硫蛋白
Creatininase amidohydrolase肌红蛋白
Spermidine.trihvdrochloride(nNOS 抑制剂 )1g包装CRH琼脂糖凝胶4B蛋白A
SAHH纤粘连蛋白
Purine-nucleoside phosphorylaseβ-乳球蛋白
ADA杆菌肽锌
GAPDH细胞松弛素B
3-Phosphoglyceric Phosphokinase噻孢霉素
Laccase from Rhus vernificera头孢菌素C锌盐
Isocitrate dehydrogenase盐酸环丙沙星
γ-MDH纺锤菌素二盐酸
Lactoperoxidase from bovine milk放线菌素D
Pullulanase托普霉素
Aldehyde Dehydrogenase, potassium-activated美满霉素
Glycerokinase两性霉素B
D-LDH氨苄青霉素钠
Lipoxidase from soybean氨苄青霉素
Spermidine.trihvdrochloride(nNOS 抑制剂 )1g包装技术优势
1. 能有效的处理土壤样品中一些很难处理的组分如: 真细菌孢子(eubacterial spores)、内芽孢(endospores)、格兰仕阳性菌(gram positive bacteria)、酵母(yeast)、线虫(nematodes)、海藻(algea)、真菌(fungi)等。
2. 样品处理过程中使用的 MT Buffer和Sodium Phosphate Buffer可在整个提取过程中有效的保护核酸,并大限度的降低RNA污染。
3. 基于硅珠的纯化方法,可有效地去除腐植酸、多元酚等PCR抑制物
4. 纯化所得的DNA可直接用于PCR、酶切等后续实验之中。
5. 对腐植酸含量特别高的样品,附加额外的处理方法。