1. 匀浆处理:a.组织 将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。
b.单层培养细胞 直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞,每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml,用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定,不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。
c.细胞悬液 离心收集细胞,每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol,反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。
3.可选步骤:如样品中含有较多蛋白质,脂肪,多糖或胞外物质(肌肉,植物结节部分等)可于2-8℃10000×g离心10分钟,取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜,多糖,高分子量DNA,上清中含有RNA。处理脂肪组织时,上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2m,剧烈振荡15秒,室温放置3分钟。
6. 2-8℃10000×g离心15分钟。样品分为三层:底层为黄色有机相,上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中,水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。
7. 把水相转移到新管中,如要分离DNA和蛋白质可保留有机相,进一步操作见后。用异丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml异丙醇,室温放置10分钟。
8. 2-8℃10000×g离心10分钟,离心前看不出RNA沉淀,离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。
9. 用75℅乙醇洗涤RNA沉淀。每使用1ml TRIzol至少加1ml 75℅乙醇。2-8℃不超过7500×g离心5分钟,弃上清。
10.室温放置干燥或真空抽干RNA沉淀,大约晾5-10分钟即可.不要真空离心干燥,过于干燥会导致RNA的溶解性大大降低。加入25-200μl无RNase的水或0.5℅SDS,用枪头吸打几次,55-60℃放置10分钟使RNA溶解.如RNA用于酶切反应,勿使用SDS溶液。RNA也可用100℅的去离子甲酰胺溶解,-70℃保存。
shgoy-6306辽东楤木皂苷VM273413-O-[β-D-glucopyranosyl(1→2)]-[ β-D-glucopyranosyl(1→3)-β-D-glucopyranosyl(1→3)] β-D-glucopyranosyl hederagenin95%
shgoy-6307辽东楤木皂苷XM27342"3-O-{[β-D-glucopyranosyl(1→2)]-[ β-D-glucopyran
osyl(1→3)-β-D-glucopyranosyl(1→3)] β-D-glucopyranosy
l}hederagenin 28-O-β-D-glucopyranosyl ester"95%
shgoy-6308芦丁M27343Rutin≥95%
shgoy-6309芦竹碱M27344Gramine≥98%
shgoy-6310氯化木兰花碱M27345Magnoflorine chloride≥98%
shgoy-6311罗汉果甜苷VM27346Mogroside V≥98%
shgoy-6312罗汉果甜苷VIM27347Mogroside VI≥98%
shgoy-6313罗汉果皂苷IVM27348Mogroside IV≥98%
shgoy-6314洛塞琳M27349Rosarin≥95%
shgoy-6315洛塞维M27350Rosavin≥95%
shgoy-6316洛缌M27351Rosin≥95%
shgoy-6317落新妇苷M27352Astilbin≥98%
shgoy-6318麻醉椒苦素M27353Methysticin≥99%
shgoy-6319马兜铃内酰胺M27354Aristololactam≥98%
shgoy-6320马兜铃酸BM27355Aristolochic acid B≥98%
shgoy-6321麦冬皂苷BM27356Ophiopogonin B≥97%
shgoy-6322麦冬皂苷DM27357Ophiopogonin D≥97%
shgoy-6323芒柄花素-7-O-β-D-葡萄糖苷M27358Fomotin-7-O-glucoside≥95%
shgoy-6324芒柄花素-7-O-葡萄糖苷 M27359Formotin-7-O-β-D-glucoside≥98%
CBZ-L-ThreonineFMOC-L-缬氨酸
L-TryptophanCBZ-D-缬氨酸
D-TrytophanL-缬氨酸甲酯盐酸盐
DL-TrytophanL-胱氨酸二甲酯
BOC-L-TryptophanL-谷氨酸二甲酯盐酸盐
DL-5-HTPL-谷氨酸二乙酯盐酸盐
L-TyrosineL-异亮氨酸甲酯盐酸盐
D-TyrosineL-亮氨酸甲酯盐酸盐
DL-TyrosineL-赖氨酸甲酯盐酸盐
3,5-Dibromo-L-TyrosineL-赖氨酸乙酯
3,5-Diiodo-L-tyrosine dihydrateL-苯丙氨酸甲酯盐酸盐
L-Tyrosine disodium saltL-苯丙氨酸乙酯盐酸盐
L-ValineL-苯甘氨酸甲酯盐酸盐
人 NK 细胞分离液 1.062200mL包装D-ValineL-苯甘氨酸乙酯盐酸盐
DL-ValineL-脯氨酸甲酯盐酸盐
Fmoc-L-valineL-脯氨酸苄酯盐酸盐
CBZ-D-ValineL-羟脯氨酸甲酯盐酸盐
H-Val-OMe•HClL-苏氨酸甲酯盐酸盐
(H-Cys-OMe)2•2HClL-色氨酸甲酯盐酸盐
H-Glu(OMe)-OMe.HClL-酪氨酸甲酯
H-Glu(OEt)-OEt•HClL-正缬氨酸
人 NK 细胞分离液 1.062200mL包装技术优势
1. 能有效的处理土壤样品中一些很难处理的组分如: 真细菌孢子(eubacterial spores)、内芽孢(endospores)、格兰仕阳性菌(gram positive bacteria)、酵母(yeast)、线虫(nematodes)、海藻(algea)、真菌(fungi)等。
2. 样品处理过程中使用的 MT Buffer和Sodium Phosphate Buffer可在整个提取过程中有效的保护核酸,并大限度的降低RNA污染。
3. 基于硅珠的纯化方法,可有效地去除腐植酸、多元酚等PCR抑制物
4. 纯化所得的DNA可直接用于PCR、酶切等后续实验之中。
5. 对腐植酸含量特别高的样品,附加额外的处理方法。