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elisa试剂盒探针设计的基本原则
点击次数：268 发布时间：2017/12/28 10:56:13
1. 保守：探针要绝对的保守，有时分型就仅仅依靠探针来决定。理论上有一个碱基不配对，就可能检测不出来。
2. Taqman探针的长度在25-32bp之间，且Tm值在68-72℃之间，确保探针的Tm值要比引物的Tm值高出5-10℃，这样可保证探针在退火时先于引物与目的片段结合。
3. 确保探针中GC含量在30-80%。
4. 避免探针中多个重复的碱基出现，尤其是要避免4个或超过4个的G碱基
5. 探针的5’端不能为G，因为即使单个G碱基与FAM荧光报告基团相连时， 也可以淬灭FAM基团所发出的荧光信号，从而导致假阴性的出现。
6. Taqman探针应靠近上游引物，即Taqman探针应靠近与其在同一条链上的 上游引物。两者的距离是探针的5’端离上游引物的3’有一个碱基。
7. 避免探针与引物之间形成二级结构。
2. Taqman探针的长度在25-32bp之间，且Tm值在68-72℃之间，确保探针的Tm值要比引物的Tm值高出5-10℃，这样可保证探针在退火时先于引物与目的片段结合。
3. 确保探针中GC含量在30-80%。
4. 避免探针中多个重复的碱基出现，尤其是要避免4个或超过4个的G碱基
5. 探针的5’端不能为G，因为即使单个G碱基与FAM荧光报告基团相连时， 也可以淬灭FAM基团所发出的荧光信号，从而导致假阴性的出现。
6. Taqman探针应靠近上游引物，即Taqman探针应靠近与其在同一条链上的 上游引物。两者的距离是探针的5’端离上游引物的3’有一个碱基。
7. 避免探针与引物之间形成二级结构。
8. 对于多重定量PCR，例如SNP分型检测时，SNP位点应设计在探针的中间位置，并且两种探针的Tm值应相近。
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