对照组和实验组细胞经以上处理, 24 h后倒置显微镜下观察细胞生长和形态学变化; 细胞经戊二醛和锇酸双重固定, 包埋, 聚合, 超薄切片机切片, 醋酸枸橼酸染色, 透射电镜观察细胞核、线粒体等超微结构形态学变化, 随机照相记录。Hoechst33258 染色后, 荧光显微镜下观察细胞核的变化。
 Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡

采用Annexin V/PI双荧光标记、流式细胞术检测细胞凋亡变化。各组细胞处理24 h后, 用0.25%胰蛋白酶消化, 4 °C低速离心收集细胞, 按照凋亡检测试剂盒说明书操作, AnnexinV/PI双标记法, 上机检测细胞凋亡, 重复3次。CellQuest软件分析结果。

 细胞内GSH、SOD、MDA和ROS检测

分别收集对照组与实验组细胞, 制备细胞匀浆, 按试剂盒说明书操作, 检测细胞内GSH、MDA含量, 以及SOD活性及细胞内ROS水平。

 Western blot检测Bcl-2和Bax蛋白水平变化

Western blot法检测细胞内Bax和Bcl-2蛋白表达量, 取对数生长期的人肝癌SMMC-7721细胞, 调整细胞浓度至5×104 /mL, Fucoidan作用细胞24 h后, 蛋白裂解液裂解各组细胞, 取上清液, BCA法测量样品中总蛋白浓度。Gel-Pro凝胶分析软件进行条带吸光度分析, 以目的蛋白与内参β-肌动蛋白条带吸光度的比值作为蛋白表达的相对含量。提取细胞总蛋白, Western印迹检测Bax和Bcl-2的表达情况。
统计学方法

采用SPSS 15.0软件对实验数据进行统计学处理, 结果以表示, 组间比较采用t检验, P<0.05为有统计学意义。

 CD36IgG 猪Ⅱ型胶原(Col Ⅱ)
 CD3蛋白IgG 猪Ⅰ型前胶原羧基端肽(PⅠCP)
 CD40结合蛋白/CD40受体相关因子1IgG 植物玉米索核苷（ZR ）
 CD43IgG 植物吲哚乙酸（IAA）
 CD44IgG 植物血凝素（PHA ）
 CD45(白细胞共同抗原) 植物维生素K1(VK1)
 CD45ROIgG 植物维生素E(VE)
 CD48IgG 植物维生素D3(VD3)
 CD4蛋白IgG 植物维生素D2(VD2)
 CD56IgG 植物维生素D(VD)
 CD5IgG 植物维生素C(VC)
 

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