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脱氧核糖核酸有规律断裂的方法
点击次数：217 发布时间：2018/4/24 12:40:47
细胞凋亡过程中,DNA有规律地断裂可以通过下述几种方法检测出来。
(1) 琼脂糖凝胶电泳法。细胞悬液经裂解消化按常规法提取DNA后, 于含EB 的琼脂糖凝胶中进行电泳,正常细胞DNA呈单一条带。细胞凋亡时呈典型的梯状条带,系180～ 200 bp 左右的及多聚核小体的梯状DNA条带。坏死时则呈现模糊的弥散状条带。DNA电泳法是判断细胞凋亡的经典方法. PEG6000 诱导的小麦叶片[7] 、羟自由基诱导的烟草细胞[8] 、细胞色素c诱导的胡萝卜和烟草原生质体[9] 和乙烯诱导的胡萝卜原生质体[10]发生PCD 时均检测到DNA 梯状条带。
(2) 流式细胞仪检测法。细胞发生凋亡时, 其细胞膜的通透性增加, 但其程度介于正常细胞和坏死细胞之间, 利用这一特点, 被检测细胞悬液用萤光素染色利用流式细胞仪测量细胞悬液中细胞萤光强度来区分正常细胞、坏死细胞和凋亡细胞。
( 3 ) 原位末端标记法( In Situ End2L abeling,ISEL )。通过DNA 多聚酶I 把已标记的核苷酸结合到DNA 的单链断裂处, 以寻找有无Ap 发生。标记的方法有同位素标记、荧光素标记、地高辛或生物素标记等。
(4) 原位切口平移法( In Situ N ick T ran slat ion, IS2N T )。利用DNA 多聚酶将核苷酸整合到Ap 细胞内断裂的DNA 3′羟基末端, 同时水解5′末端,
以修复DNA。若用已标记的核苷酸, 即可显示出有断裂DNA 的细胞。该法同样也可用于细胞悬液中Ap 的观察。
( 5) 末端转移酶介导的缺口末端标记法(TdT 2m e2diated X2dU TP n ick end labeling, TUN EL )。末端转移酶(TdT ) 介导的X2dU TP 缺口标记法是目标原位检测Ap *为敏感、快速、特异的方法, 其具有广泛的应用前景。末端转移酶(TdT ) 可催化在DNA 片段的3′羟基末端合成多核苷酸聚合物的反应, 即DNA 片段加尾。利用末端转移酶(TdT ) 将标记的脱氧核苷酸转移到DNA 缺口或3′羟基末端上, 通常所用的核苷酸为dU TP, 标记物为地戈辛、生物素、荧光素等。
(6) EL ISA 法。对Ap 细胞内DNA 片段的检测还可用EL ISA 法。悬浮细胞经裂解, 高速离心去除核的成分后, 取上清加入已包被有抗组蛋白抗体的反应板, 反应后再加酶标抗DNA 抗体, 若上清中含断裂的DNA片段, 则可通过此双抗体夹心法得以检出[11]。
高铼酸钾,99％ (metals basis), Re 64％ Potassium perrhenate 10466-65-6
2-乙基己醇 2-Ethylhexan-1-ol;2-Ethylhexyl alcohol 104-76-7
己二酸二甲酯 DiMethyl adipate 627-93-0
草酸二甲酯;乙二酸二甲酯;草酸甲酯 DiMethyl oxalate;Ethanedioic acid diMethyl ester;Methyl oxalate;Oxalic diMethyl ester 553-90-2
氨基比林;匹拉米洞;匹拉米董;二甲氨基安替比林;4-二甲氨基-1,5-二甲基-2-苯基-3-吡唑啉酮;4-二甲氨基安替比林 AMinopyrine;PyraMidone;AMidopyrine;AMinophenazone;4-DiMethylaMino-2,3-diMethyl-1-phenyl-3-pyrazolin-5-one;DiMethyl-aMinophenyldiMethylpyrazolone;4-DiMethylaMino-1,5-diMethyl-2-phenyl-2-pyrazolone;DiMethylaMinophenazone 58-15-1
1-萘胺盐酸盐;1-氨基萘盐酸盐; α-萘胺盐酸盐 1-NaphthylaMine hydrochloride;1-AMinonaphthalene hydrochloride; 552-46-5
N-乙酰-L-半胱氨酸;L-α-乙酰氨基-β-巯基丙酸;N-乙酰-3-巯基丙氨酸 N-Acetyl-L-cysteine;L-α-AcetaMido-β-Mercaptopropionic acid;N-Acetyl-3-Mercaptoalanine 616-91-1
大理石;云石 Marble 471-34-1
龙胆紫 Gentian Violet;C.I. 42555/42535 548-62-9
曲司氯铵相关物质A TrospiuM Chloride Related CoMpound A 76-93-7
(1) 琼脂糖凝胶电泳法。细胞悬液经裂解消化按常规法提取DNA后, 于含EB 的琼脂糖凝胶中进行电泳,正常细胞DNA呈单一条带。细胞凋亡时呈典型的梯状条带,系180～ 200 bp 左右的及多聚核小体的梯状DNA条带。坏死时则呈现模糊的弥散状条带。DNA电泳法是判断细胞凋亡的经典方法. PEG6000 诱导的小麦叶片[7] 、羟自由基诱导的烟草细胞[8] 、细胞色素c诱导的胡萝卜和烟草原生质体[9] 和乙烯诱导的胡萝卜原生质体[10]发生PCD 时均检测到DNA 梯状条带。
(2) 流式细胞仪检测法。细胞发生凋亡时, 其细胞膜的通透性增加, 但其程度介于正常细胞和坏死细胞之间, 利用这一特点, 被检测细胞悬液用萤光素染色利用流式细胞仪测量细胞悬液中细胞萤光强度来区分正常细胞、坏死细胞和凋亡细胞。
( 3 ) 原位末端标记法( In Situ End2L abeling,ISEL )。通过DNA 多聚酶I 把已标记的核苷酸结合到DNA 的单链断裂处, 以寻找有无Ap 发生。标记的方法有同位素标记、荧光素标记、地高辛或生物素标记等。
(4) 原位切口平移法( In Situ N ick T ran slat ion, IS2N T )。利用DNA 多聚酶将核苷酸整合到Ap 细胞内断裂的DNA 3′羟基末端, 同时水解5′末端,
以修复DNA。若用已标记的核苷酸, 即可显示出有断裂DNA 的细胞。该法同样也可用于细胞悬液中Ap 的观察。
( 5) 末端转移酶介导的缺口末端标记法(TdT 2m e2diated X2dU TP n ick end labeling, TUN EL )。末端转移酶(TdT ) 介导的X2dU TP 缺口标记法是目标原位检测Ap *为敏感、快速、特异的方法, 其具有广泛的应用前景。末端转移酶(TdT ) 可催化在DNA 片段的3′羟基末端合成多核苷酸聚合物的反应, 即DNA 片段加尾。利用末端转移酶(TdT ) 将标记的脱氧核苷酸转移到DNA 缺口或3′羟基末端上, 通常所用的核苷酸为dU TP, 标记物为地戈辛、生物素、荧光素等。
(6) EL ISA 法。对Ap 细胞内DNA 片段的检测还可用EL ISA 法。悬浮细胞经裂解, 高速离心去除核的成分后, 取上清加入已包被有抗组蛋白抗体的反应板, 反应后再加酶标抗DNA 抗体, 若上清中含断裂的DNA片段, 则可通过此双抗体夹心法得以检出[11]。
高铼酸钾,99％ (metals basis), Re 64％ Potassium perrhenate 10466-65-6
2-乙基己醇 2-Ethylhexan-1-ol;2-Ethylhexyl alcohol 104-76-7
己二酸二甲酯 DiMethyl adipate 627-93-0
草酸二甲酯;乙二酸二甲酯;草酸甲酯 DiMethyl oxalate;Ethanedioic acid diMethyl ester;Methyl oxalate;Oxalic diMethyl ester 553-90-2
氨基比林;匹拉米洞;匹拉米董;二甲氨基安替比林;4-二甲氨基-1,5-二甲基-2-苯基-3-吡唑啉酮;4-二甲氨基安替比林 AMinopyrine;PyraMidone;AMidopyrine;AMinophenazone;4-DiMethylaMino-2,3-diMethyl-1-phenyl-3-pyrazolin-5-one;DiMethyl-aMinophenyldiMethylpyrazolone;4-DiMethylaMino-1,5-diMethyl-2-phenyl-2-pyrazolone;DiMethylaMinophenazone 58-15-1
1-萘胺盐酸盐;1-氨基萘盐酸盐; α-萘胺盐酸盐 1-NaphthylaMine hydrochloride;1-AMinonaphthalene hydrochloride; 552-46-5
N-乙酰-L-半胱氨酸;L-α-乙酰氨基-β-巯基丙酸;N-乙酰-3-巯基丙氨酸 N-Acetyl-L-cysteine;L-α-AcetaMido-β-Mercaptopropionic acid;N-Acetyl-3-Mercaptoalanine 616-91-1
大理石;云石 Marble 471-34-1
龙胆紫 Gentian Violet;C.I. 42555/42535 548-62-9
曲司氯铵相关物质A TrospiuM Chloride Related CoMpound A 76-93-7
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