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细胞培养中染鉴别方法
点击次数：175 发布时间：2018/7/5 10:04:52
1、细菌、真菌污染的检测
1）肉眼观察
细菌、真菌污染常在传代、换液、加样等开放性操作之后发生，而且增生迅速，若有污染，在48小时内可明显观察到，例如培养液变混浊，或略加振荡有很多漂浮物漂起。
2）接种观察
采用普通肉汤接种或用未加双抗药物的培养液接种，也可发现是否有污染。
3）镜下观察
在倒置显微镜的高倍镜下可见培养液中有大量圆球状颗粒漂浮，即为细菌污染。
若细胞之间有丝状、管状、树枝状或卵形的物质常为真菌污染。
2、支原体污染的检测
1）相差显微镜观察
直接取少许培养液滴在载物片上，再盖上盖片观察，支原体在镜下呈暗色微小颗粒，多位于细胞与细胞之间，有时可见类似于布朗运动的表现。
应注意与细胞破碎溢出的内容物如线粒体等相区别。
2）荧光染色法观察
用荧光染料Hoechst33258，此染料能与DNA特异地结合，可使支原体内的DNA着色，荧光显微镜下支原体呈绿色小点，散在于细胞周围或附于细胞表面。
3）电镜检测
若条件许可，可用扫描电镜或透射电镜观察。一般在细胞培养48～72小时，细胞接近汇合前，用胰酶消化细胞制成细胞悬液后进行固定、包埋、切片后才能进行观察。
4）培养检测
将细胞悬液5mL加入45mL支原体肉汤培养基，培养14天后观察肉汤培养有无雾状沉淀，然后取0.5ml加入已冷却到50℃的培养基中，再用琼脂培养基做分离培养，37℃培养3天观察有无“荷包蛋”菌落出现。
3、病毒的检测
1) 应用电镜技术快速诊断动物病毒病
冠状病毒电镜图：
1）肉眼观察
细菌、真菌污染常在传代、换液、加样等开放性操作之后发生，而且增生迅速，若有污染，在48小时内可明显观察到，例如培养液变混浊，或略加振荡有很多漂浮物漂起。
2）接种观察
采用普通肉汤接种或用未加双抗药物的培养液接种，也可发现是否有污染。
3）镜下观察
在倒置显微镜的高倍镜下可见培养液中有大量圆球状颗粒漂浮，即为细菌污染。
若细胞之间有丝状、管状、树枝状或卵形的物质常为真菌污染。
2、支原体污染的检测
1）相差显微镜观察
直接取少许培养液滴在载物片上，再盖上盖片观察，支原体在镜下呈暗色微小颗粒，多位于细胞与细胞之间，有时可见类似于布朗运动的表现。
应注意与细胞破碎溢出的内容物如线粒体等相区别。
2）荧光染色法观察
用荧光染料Hoechst33258，此染料能与DNA特异地结合，可使支原体内的DNA着色，荧光显微镜下支原体呈绿色小点，散在于细胞周围或附于细胞表面。
3）电镜检测
若条件许可，可用扫描电镜或透射电镜观察。一般在细胞培养48～72小时，细胞接近汇合前，用胰酶消化细胞制成细胞悬液后进行固定、包埋、切片后才能进行观察。
4）培养检测
将细胞悬液5mL加入45mL支原体肉汤培养基，培养14天后观察肉汤培养有无雾状沉淀，然后取0.5ml加入已冷却到50℃的培养基中，再用琼脂培养基做分离培养，37℃培养3天观察有无“荷包蛋”菌落出现。
3、病毒的检测
1) 应用电镜技术快速诊断动物病毒病
冠状病毒电镜图：
2) 逆转录_聚合酶链反应RT_PCR检测病毒
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原创作者：上海谷研实业有限公司
