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从神经组织解离到建立原代细胞培养的步骤
点击次数：299 发布时间：2018/9/13 10:31:41
从神经组织解离到建立原代细胞培养通常需要几天，甚至数周。这个过程不仅繁琐，还很单调。其实还有一种捷径，跟着美天旎三步走，几个小时就能实现从神经组织到体外培养细胞系的产生。这个无缝的流程让研究人员充分利用了宝贵的样品，同时还有宝贵的时间。本文就举个例子，说明一下从组织样品到细胞培养的每一步。
步骤1：神经组织解离
神经组织的解离是第1步。Neural Tissue Dissociation Kit能够将胚胎、新生或成体来源的组织温和解离成单细胞悬液。两步 的酶解过程只需要不到一个小时，就能产生大量下游分析即用的活细胞。解离过程可以手工完成，也能由gentleMACS™ Dissociator来自动完成。
解离过程如下：
将脑组织切成小块，收集在HBSS中，300×g离心2分钟 → 加入预热的酶混合物1，37°C孵育 → 再加入酶混合物2 → 解离（手工解离或自动解离）→ 加到30 μm细胞滤器中，用HBSS洗涤两次
步骤2：髓磷脂碎片的去除+神经细胞的分离
获得了单细胞悬液之后，下一步就是目的细胞的分离。在细胞分离方面，MACS技术无疑是金标准，目前发表的文献已达12000多篇。别急，在细胞分离之前还有一个小插曲。那就是去除对后续免疫标记有干扰的髓磷脂（myelin）。美天旎*近推出的Myelin Removal Beads能够从神经细胞悬液中去除髓磷脂，标记+分离的全过程只需要35分钟。
可能你会觉得，髓磷脂也没什么大不了的，不去除也行吧。美天旎就做过实验，将步骤1得到的细胞悬液分成两组，一组用Myelin Removal Beads处理，一组不处理。然后利用Anti-Prominin-1 MicroBeads分别从两组中分离神经前体细胞。组（处理过）的回收率达95%，第二组（未处理）只有80%。瞧，这就是差别。
除了Anti-Prominin-1 MicroBeads，美天旎还提供了多种磁珠，能识别各种免疫球蛋白亚型、亲和标签和荧光基团，而且多种抗体通过间接的磁性标记，也能用于MACS细胞分离。
步骤3：神经细胞培养
分离到了你想要的神经细胞，下一步就是原代培养了。美天旎的MACS Neuro Medium和MACS Supplement B27 PLUS这时就派上用场了。MACS Neuro Medium是化学成分限定的无血清培养基，专门为免疫磁珠分离的神经细胞而优化。
步骤1：神经组织解离
神经组织的解离是第1步。Neural Tissue Dissociation Kit能够将胚胎、新生或成体来源的组织温和解离成单细胞悬液。两步 的酶解过程只需要不到一个小时，就能产生大量下游分析即用的活细胞。解离过程可以手工完成，也能由gentleMACS™ Dissociator来自动完成。
解离过程如下：
将脑组织切成小块，收集在HBSS中，300×g离心2分钟 → 加入预热的酶混合物1，37°C孵育 → 再加入酶混合物2 → 解离（手工解离或自动解离）→ 加到30 μm细胞滤器中，用HBSS洗涤两次
步骤2：髓磷脂碎片的去除+神经细胞的分离
获得了单细胞悬液之后，下一步就是目的细胞的分离。在细胞分离方面，MACS技术无疑是金标准，目前发表的文献已达12000多篇。别急，在细胞分离之前还有一个小插曲。那就是去除对后续免疫标记有干扰的髓磷脂（myelin）。美天旎*近推出的Myelin Removal Beads能够从神经细胞悬液中去除髓磷脂，标记+分离的全过程只需要35分钟。
可能你会觉得，髓磷脂也没什么大不了的，不去除也行吧。美天旎就做过实验，将步骤1得到的细胞悬液分成两组，一组用Myelin Removal Beads处理，一组不处理。然后利用Anti-Prominin-1 MicroBeads分别从两组中分离神经前体细胞。组（处理过）的回收率达95%，第二组（未处理）只有80%。瞧，这就是差别。
除了Anti-Prominin-1 MicroBeads，美天旎还提供了多种磁珠，能识别各种免疫球蛋白亚型、亲和标签和荧光基团，而且多种抗体通过间接的磁性标记，也能用于MACS细胞分离。
步骤3：神经细胞培养
分离到了你想要的神经细胞，下一步就是原代培养了。美天旎的MACS Neuro Medium和MACS Supplement B27 PLUS这时就派上用场了。MACS Neuro Medium是化学成分限定的无血清培养基，专门为免疫磁珠分离的神经细胞而优化。
原创作者：上海谷研实业有限公司
