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细菌蛋白质提取试剂盒的储存条件
点击次数：162 发布时间：2017/11/6
细菌蛋白质提取试剂盒储存条件：
专区DNA酶/ RNA酶，溶菌酶和PMSF，在-20 0 ?，并存储在室温下的其余部分的内容。的试剂盒是稳定的，在室温下为12个月。对于较长的存储，保持冷的所有内容。
细菌蛋白质提取试剂盒程序：
感兴趣的蛋白质的表达，在5000×g离心10分钟，通过离心收集细胞。重新- 移动介质，并用PBS洗涤沉淀。重悬细胞沉淀在每100ml细胞培养细胞裂解液4 ??毫升1X。加入40ul PMSF和80μL溶菌酶，细胞悬浮液在冰上孵育30分钟。
上的摆动平台10分钟，在4℃下温育混合物取20ul DNA酶I /核糖核酸酶，继续在4℃下摇动孵育另外10分钟除去不溶的碎片，以3000g离心30分钟，在4℃下 收集超- 上清（细胞裂解液）在新鲜的管。
试剂的提取，通过电泳分析20微升等分试样，通过10％SDS-PAGE。和存储包含目标蛋白的馏分在-70℃或直接加载到纯化塔。
细菌蛋白质提取试剂盒注意事项：
细菌蛋白质提取淬取。
执行步骤2-5，在4°C。
专区DNA酶/ RNA酶，溶菌酶和PMSF，在-20 0 ?，并存储在室温下的其余部分的内容。的试剂盒是稳定的，在室温下为12个月。对于较长的存储，保持冷的所有内容。
细菌蛋白质提取试剂盒程序：
感兴趣的蛋白质的表达，在5000×g离心10分钟，通过离心收集细胞。重新- 移动介质，并用PBS洗涤沉淀。重悬细胞沉淀在每100ml细胞培养细胞裂解液4 ??毫升1X。加入40ul PMSF和80μL溶菌酶，细胞悬浮液在冰上孵育30分钟。
上的摆动平台10分钟，在4℃下温育混合物取20ul DNA酶I /核糖核酸酶，继续在4℃下摇动孵育另外10分钟除去不溶的碎片，以3000g离心30分钟，在4℃下 收集超- 上清（细胞裂解液）在新鲜的管。
试剂的提取，通过电泳分析20微升等分试样，通过10％SDS-PAGE。和存储包含目标蛋白的馏分在-70℃或直接加载到纯化塔。
细菌蛋白质提取试剂盒注意事项：
细菌蛋白质提取淬取。
执行步骤2-5，在4°C。
蛋白酶抑制剂可能会增加，但不添加EDTA或其它螯合剂，当使用镍2 +亲和层析柱，螯合剂破坏列组氨酸的结合能力。可能有必要通过上清液通过0.45微米的过滤器，以防止堵塞的树脂在下面的净化。细菌细胞也可以通过超声处理（3×10秒）对于某些蛋白被裂解，但是，保持细胞的冷（0℃）中，在超声波处理过程中。建议使用提取蛋白后尽快提取。苯，应贮存于-20℃下溶解在异丙醇中。
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