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分析T细胞增殖的优势与不足
点击次数：262 发布时间：2018/9/7
对于细胞增殖的分析，目前一般分为两大阵营。在个阵营中，研究人员依赖某些试剂来区分静止和分裂的细胞。这些试剂包括核苷类似物（如BrdU）、DNA染料（Hoechst和PI），和细胞周期调控蛋白（如Ki-67）的抗体。有时，它们也能确定细胞周期的阶段。
第二大阵营则更直接地表明细胞自标记起共分裂了多少代。在此，细胞被标记上永久连接的染料。当细胞分裂时，染料也随之分裂，信号强度减半，这样就能了解细胞分裂了多少代。不过*多就6-8代，之后，信号通常太暗淡，难以与自发荧光区分开。下面就让我们来看看这些分析的优势与不足。
流式来帮忙
在流式细胞分析中，荧光标记的细胞排队通过流式细胞仪。仪器激发荧光基团，并定量特定波长下的荧光。荧光基团可由细胞的DNA编码（如GFP），也可与抗体结合，或与特定的细胞组分发生反应。
流式分析不仅能让细胞被一一分析，“这也是一种非常强大的技术，让我们能一次测定许多不同的性质，”Robert Balderas谈道。他是BD生命科学部门负责流式细胞仪开发的副总裁。“作为一个平台，它让我们能查看细胞的大小和粒度，细胞上有什么，细胞内有什么。”
Balderas认为，更重要的是，流式细胞分析给了我们一个大海捞针的机会。研究人员可以利用此技术发现异质群体中独特的细胞类型，例如对分化标志物染色，对细胞表面活化标志物染色。此类免疫分型不仅能够区分Th1、Th2和Treg细胞，还能确定每个亚群的标志物有何不同。
染料选择多
据Roswell Park癌症研究所的肿瘤学教授Paul Wallace介绍，追踪T细胞增殖的常用方法是将荧光基团与细胞内的蛋白质相连接（蛋白质染料）或让荧光基团插入细胞膜中（细胞膜染料）。
蛋白质染料的代表是羧基荧光素二乙酸盐琥珀酰亚胺酯（CFDA-SE），这是一种不带电荷的染料，很容易穿过细胞膜。一旦进入细胞，CFDA-SE被内源性的酯酶裂解，产生反应性的醛基，不加选择地与蛋白质上的氨基结合，从而标记蛋白质。在蓝光的激发下，CFDA-SE发出绿色荧光。不过，*近也有一些类似的蛋白质染料被开发出，它们有着不同的光谱特性，可以与CFDA-SE可能干扰的荧光试剂配合使用。
CFDA-SE标记细胞的荧光非常稳定和均匀，细胞每分裂一次，荧光强度就减弱一半，这样通过流式细胞仪检测就能检测出没有分裂的细胞。整个标记过程也相当简单。由于化合物只与蛋白质的一小部分相互作用，故它对细胞功能的影响似乎不大。不过爱因斯坦医学院的Steven Porcelli教授也指出，可能还是有一定的影响。因此他建议优化CFDA-SE的浓度。
