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人B淋巴母细胞；HMy2.CIR操作步骤
点击次数：92发布时间：2017/11/9 16:23:22
更新日期：2021/11/4 0:55:13
所 在 地：中国大陆
产品型号：
相关标签：ＡＴＣＣ细胞
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详细内容
细胞名称 人B淋巴母细胞；HMy2.CIR操作步骤
形态特性 淋巴母细胞
生长特性 悬浮生长
特征特性 ARH-77细胞株的快速生长突变株HMy.2 B用γ射线照射，选择HLA I型抗原表达缺失的细胞，得到HMy2.CIR细胞株。 这株细胞不表达HLA A位点和B位点的产物，但表达少量HLA Cw4。 这株细胞适于用作I型主要组织相容性抗原基因的转染宿主。 有报道称ARH-77细胞株呈EB核抗原阳性(EBNA+)和EB病毒荚膜抗原阳性(EBVCA+)。 由于Hmy2.CIR细胞株起源于ARH-77细胞株的快速生长突变株HMy.2 B，推测它也是EBNA+。
培养条件 IMDM: Iscove＇s Modiefied Dulbecco＇s Medium 优质胎牛血清，10%
传代方法 1:2。3天内可长满。
传代情况 PN5
冻存条件 基础培养基+8%DMSO+20%FBS
支原体检测 阴性
STR
同工酶
染色体
使用权限 A类
1）将培养基在37℃水浴锅预热；准备一个15mL无菌的离心管，加入8mL预热培养基。
2）将冻存细胞从液氮罐中取出，快速放入37℃水浴锅中复温（可准备一洁净的烧杯，装满37℃的水，细胞冻存管取出后迅速放入烧杯内，再逐步转移到水浴锅中）。轻轻晃动冻存管，使细胞能在1~2min内完全解冻，使细胞能尽快通过*易受损的温度段（-5~0℃）。注意冻存管管口不能没入水中，BIU-87(人膀胱癌细胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭冻存管后再置于超净台内，将管内细胞转移至准备好的离心管内，轻轻吹打液体，使细胞均匀分散，降低DMSO浓度，吹打时避免产生气泡。用新鲜培养基洗管壁2次，均转移至离心管内。
4）800rpm离心5min，弃上清，加入新鲜的培养基，吹打制成细胞悬液。
5）将细胞悬液转移至T25细胞瓶内，补加适量的培养基，轻轻晃动细胞瓶使细胞分布均匀，放入温箱内培养。
6）第二天观察细胞贴壁生长情况，换新鲜培养基以去除死细胞。继续培养，待细胞长至80~90%汇合时正常传代。一般刚复苏的细胞需经过2~3次传代，细胞活力恢复后才能进行后续的实验。
人B淋巴母细胞；HMy2.CIR操作步骤 操作步骤：
人B淋巴母细胞；HMy2.CIR操作步骤 操作步骤：
1. 将无菌的盖玻片置于细胞培养皿中，将细胞悬液接种于培养皿中进行细胞爬片，待细胞长至80%时取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室温孵育爬片20min，使细胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻断内源性过氧化物酶，室温孵育15min（一般用甲醇或蒸馏水稀释30%过氧化氢），PBS冲洗3次，每次3min。
5. 封闭血清室温孵育20min，PBS冲洗3次，每次3min。
6. 细胞特异性一抗孵育：按照抗体说明书稀释比例稀释好一抗，滴加在爬片上，于4°C湿盒中孵育一夜，PBS冲洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：选与一抗对应的二抗，按比例稀释后滴加在爬片上，37°C湿盒中孵育30min，PBS冲洗3次，每次3min。
8. 将爬片周围水渍吸干，爬片上滴加新鲜配制的DAB显色液，显微镜下观察，当出现棕黄色或棕褐色的阳性信号时用蒸馏水冲洗终止显色。
9. 复染：用Harris苏木素复染30s~1min，水洗后用1%的盐酸酒精分化，再用蒸馏水（或PBS）水洗返蓝。
10. 封片：将中性树胶滴在爬片一侧，再用盖玻片盖上，先放平盖玻片一侧再轻轻放下另一侧，以免产生气泡，封好的爬片平放置于通风厨中晾干。
11. 镜检观察。
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FMOC-D-缬氨酸/芴甲氧羰基-D-缬氨酸/Fmoc-D-Val-OH，Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌，84624-17-92～8℃特纯，99%5克A0450
，Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌，25克
，Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌，100克
中文名称： FMOC-D-缬氨酸
其他中文名称： 芴甲氧羰基-D-缬氨酸；N-(9-芴甲氧羰基)-D-缬氨酸
英文名称： Fmoc-D-Val-OH
其他英文名称： N-(9-Fluorenylmethoxycarbonyl)-D-valine；Fmoc-D-valine；2-{[(9H-Fluoren-9-ylmethoxy)carbonyl]amino}-3-methylbutanoic acid
产品规格： 特纯，99%
包装：5克
CAS号：84624-17-9
C20H21NO4=339.39
人B淋巴母细胞；HMy2.CIR操作步骤级别：Purum
含量：≥99.0%
熔点：143～145℃
比旋光度：+16.5～+17.5°(C=1,DMF)
性状：结晶粉末。
用途：生化研究。多肽合成
保存：2～8℃
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