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冷冻保存方法二:冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降1-3℃至–80℃以下,再放入液氮槽期储存。-20℃不可超过1小时,以防止冰晶过大,造成细胞大量死亡,也可跳过此步骤直接放入-80℃冰箱中,但存活率稍微降低一些。
细胞名称 人肺成纤维细胞;HFL1培养
形态特性 成纤维细胞样
生长特性 贴壁生长
特征特性
培养条件 F12K 优质胎牛血清,10%
传代方法 消化3-5分钟。1:2。3天内可长满。
传代情况 P(10+5)
冻存条件 基础培养基+8%DMSO+20%FBS
支原体检测 阴性
STR
同工酶
染色体
使用权限 A类
人肺成纤维细胞;HFL1培养细胞培养步骤:
一.培养基及培养冻存条件准备:
1、准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640:GIBCO,货号31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸钠 0.11g/L),90%;优质胎牛血清,10%。
2、培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37摄氏度,培养箱湿度为70%-80%。
3、冻存液:90%完全培养基,10%DMSO,现用现配。液氮储存。
二、细胞处理:
1、复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入10cm皿中,加入约8ml培养基,培养过夜)。第二天换液并检查细胞密度。
2、细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
人肺成纤维细胞;HFL1培养对于贴壁细胞,传代可参考以下方法:
1)弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2)加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3)按6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。
4)将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
人肺成纤维细胞;HFL1培养对于悬浮细胞,传代可参考以下方法:
方法一:收集细胞,1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀,将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
方法二:可选择半数换液方式,弃去半数培养基后,将剩余细胞悬起,将细胞悬液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
3、细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时,弃去培养基后加入少量胰酶,细胞变圆脱落后,加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中,再添加10%DMSO后进行冻存。悬浮细胞冻存时,应将细胞收集,1000RPM条件下离心4分钟,少量保存上清液(防止细胞吸走),加入部分新鲜培养基,加入到冻存管中,在冻存管中加入10%DMSO后进行冻存。
人肺成纤维细胞;HFL1培养注意事项:
1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好,培养液是否有漏液、浑浊等现象,若有上述现象发生请及时和我们联系。
2. 仔细阅读细胞说明书,了解细胞相关信息,如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等。
3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面,显微镜下观察细胞状态。因运输问题贴壁细胞会有少量从瓶壁脱落,将细胞置于培养箱内静置培养过夜,隔天再取出观察。此时多数细胞均会贴壁,若细胞仍不能贴壁请用台盼蓝染色测定细胞活力,如果证实细胞活力正常,请将细胞离心后用新鲜培养基再次贴壁培养;如果染色结果显示细胞无活力,请拍下照片及时和我们联系,信息确认后我们为您再免费寄送一次。
4. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。培养瓶内多余的培养基可收集备用,细胞传代时可以一定比例和客户自备的培养基混合,使细胞逐渐适应培养条件。
5. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片,记录细胞状态,便于和公司技术部沟通交流。
6. 该细胞只能用于科研,不得用于临床应用。
FN98552http://www.chemfaces.com/natural/Folic-acid-CFN98552.html59-30-3Folic acidAlkaloids>=98%C19H19N7O6441.420mg
CFN98612http://www.chemfaces.com/natural/Cimifugin-CFN98612.html37921-38-3CimifuginFlavonoids>=98%C16H18O6306.3 20mg
CFN98553http://www.chemfaces.com/natural/Salvianolic-acid-C-CFN98553.html115841-09-3Salvianolic acid CPhenylpropanoids>=98%C26H20O10492.4420mg
CFN98557http://www.chemfaces.com/natural/Scutellarein-CFN98557.html529-53-3ScutellareinFlavonoids>=98%C15H10O6286.2420mg
CFN98620http://www.chemfaces.com/natural/Isovitexin-CFN98620.html38953-85-4IsovitexinFlavonoids>=98%C21H20O10432.4 20mg
CFN98623http://www.chemfaces.com/natural/Nuezhenide-CFN98623.html39011-92-2NuezhenideIridoids>=98%C31H42O17686.7 20mg
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CFN98569http://www.chemfaces.com/natural/Rhaponiticin-CFN98569.html155-58-8RhaponiticinPhenols>=98%C21H24O9420.3920mg
CFN98575http://www.chemfaces.com/natural/Benzoylmesaconine-CFN98575.html63238-67-5BenzoylmesaconineAlkaloids>=98%C31H43NO10589.6820mg
CFN98577http://www.chemfaces.com/natural/Benzoylaconine-CFN98577.html466-24-0BenzoylaconineAlkaloids>=98%C32H45NO10603.720mg
CFN98585http://www.chemfaces.com/natural/Maoecrystal-A-CFN98585.html96850-30-5Maoecrystal ADiterpenoids>=95%C22H28O6388.4510mg
CFN98669http://www.chemfaces.com/natural/Crategolic-acid-CFN98669.html4373-41-5Crategolic acidTriterpenoids>=98%C30H48O4472.7 20mg
-缬氨酰-L-白氨酰-L-赖氨酸对硝基苯胺/D-缬氨酰-L-亮氨酰-L-赖氨酰对硝基苯胺/D-Val-Leu-Lys PNA?2HC1,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,62354-43-2保存:-20℃BR,98%5毫克A0455
,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,25毫克
中文名称: D-缬氨酰-L-白氨酰-L-赖氨酸对硝基苯胺
其他中文名称: D-缬氨酰-L-亮氨酰-L-赖氨酰对硝基苯胺
英文名称: D-Val-Leu-Lys PNA?2HC1
其他英文名称: D-Val-Leu-Lys p-nitroanilide dihydrochloride;D-Val-Leu-Lys 4-nitroanilide dihydrochloride;D-Val-Leu-Lys-pNA dihydrochloride; D-Valyl-L-leucyl-L-lysine 4-nitroanilide dihydrochloride
产品规格: BR,98%
包装:5毫克/25毫克
Z-甘氨酰-L-脯氨酰-L-精氨酰对硝基苯胺醋酸盐/Z-甘氨酰-L-脯氨酰-L-精氨酰对硝基苯胺乙酸盐/Z-Gly-Pro-Arg PNA acetate salt,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,102679-70-9保存:-20℃BR,98%25毫克A0456
中文名称: Z-甘氨酰-L-脯氨酰-L-精氨酰对硝基苯胺醋酸盐
其他中文名称: Z-甘氨酰-L-脯氨酰-L-精氨酰对硝基苯胺乙酸盐
英文名称: Z-Gly-Pro-Arg PNA acetate salt
其他英文名称: Z-Gly-Pro-Arg p-nitroanilide acetate salt
产品规格: BR,98%
包装:25毫克
CAS号:102679-70-9
C27H34N8O7=582.61
级别:BR
人肺成纤维细胞;HFL1培养含量:≥98.0%(TLC)
含氮量:19.2%
碳:55.6%
性状:粉末。溶于甲醇:20mg/ml,溶液呈清澈无色至淡黄色
用途:生化研究。
保存:-20℃