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人胚胎皮肤成纤维细胞；HES操作步骤
点击次数：278发布时间：2017/11/9 17:09:49
更新日期：2021/11/4 0:55:13
所 在 地：中国大陆
产品型号：
相关标签：ＡＴＣＣ细胞
优质供应
详细内容
细胞名称 人胚胎皮肤成纤维细胞；HES操作步骤
形态特性 成纤维细胞样
生长特性 贴壁生长
特征特性 该细胞系来源于一男性胚胎的皮肤组织。2005年由中国科学院昆明细胞库建立。
培养条件 DMEM-H: Dulbecco＇s Modified Eagle＇s Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose) 15%NBS
传代方法 1：2传代；3-4天一次
传代情况 P3
冻存条件 基础培养基+8%DMSO+20%FBS
支原体检测 荧光法（-）
STR -
同工酶
染色体
使用权限 A类
1）将培养基在37℃水浴锅预热；准备一个15mL无菌的离心管，加入8mL预热培养基。
2）将冻存细胞从液氮罐中取出，快速放入37℃水浴锅中复温（可准备一洁净的烧杯，装满37℃的水，细胞冻存管取出后迅速放入烧杯内，再逐步转移到水浴锅中）。轻轻晃动冻存管，使细胞能在1~2min内完全解冻，使细胞能尽快通过*易受损的温度段（-5~0℃）。注意冻存管管口不能没入水中，BIU-87(人膀胱癌细胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭冻存管后再置于超净台内，将管内细胞转移至准备好的离心管内，轻轻吹打液体，使细胞均匀分散，降低DMSO浓度，吹打时避免产生气泡。用新鲜培养基洗管壁2次，均转移至离心管内。
4）800rpm离心5min，弃上清，加入新鲜的培养基，吹打制成细胞悬液。
5）将细胞悬液转移至T25细胞瓶内，补加适量的培养基，轻轻晃动细胞瓶使细胞分布均匀，放入温箱内培养。
6）第二天观察细胞贴壁生长情况，换新鲜培养基以去除死细胞。继续培养，待细胞长至80~90%汇合时正常传代。一般刚复苏的细胞需经过2~3次传代，细胞活力恢复后才能进行后续的实验。
人胚胎皮肤成纤维细胞；HES操作步骤 操作步骤：
人胚胎皮肤成纤维细胞；HES操作步骤 操作步骤：
1. 将无菌的盖玻片置于细胞培养皿中，将细胞悬液接种于培养皿中进行细胞爬片，待细胞长至80%时取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室温孵育爬片20min，使细胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻断内源性过氧化物酶，室温孵育15min（一般用甲醇或蒸馏水稀释30%过氧化氢），PBS冲洗3次，每次3min。
5. 封闭血清室温孵育20min，PBS冲洗3次，每次3min。
6. 细胞特异性一抗孵育：按照抗体说明书稀释比例稀释好一抗，滴加在爬片上，于4°C湿盒中孵育一夜，PBS冲洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：选与一抗对应的二抗，按比例稀释后滴加在爬片上，37°C湿盒中孵育30min，PBS冲洗3次，每次3min。
8. 将爬片周围水渍吸干，爬片上滴加新鲜配制的DAB显色液，显微镜下观察，当出现棕黄色或棕褐色的阳性信号时用蒸馏水冲洗终止显色。
9. 复染：用Harris苏木素复染30s~1min，水洗后用1%的盐酸酒精分化，再用蒸馏水（或PBS）水洗返蓝。
10. 封片：将中性树胶滴在爬片一侧，再用盖玻片盖上，先放平盖玻片一侧再轻轻放下另一侧，以免产生气泡，封好的爬片平放置于通风厨中晾干。
11. 镜检观察。
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DL-高半胱氨酸硫酸内酯盐酸盐/DL-高半胱氨酸硫内脂盐酸盐/DL-高半胱氨酸硫内酯盐酸盐/混旋-高胱氨酸硫羟乙酮/高半胱氨酸硫内酯盐酸盐/DL-高半胱氨酸硫醇内酯盐酸盐/DL-Homocysteine thiolactone hydrochloride，Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌，6038-19-3RTBR，98%25克A0513
，Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌，100克
，Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌，500克
中文名称： DL-高半胱氨酸硫酸内酯盐酸盐
其他中文名称： DL-高半胱氨酸硫内脂盐酸盐；DL-高半胱氨酸硫内酯盐酸盐；混旋-高胱氨酸硫羟乙酮；高半胱氨酸硫内酯盐酸盐；DL-高半胱氨酸硫醇内酯盐酸盐
英文名称： DL-Homocysteine thiolactone hydrochloride
其他英文名称： DL-2-Amino-4-mercaptobutyric acid 1,4-thiolactone hydrochloride
产品规格： BR，98%
包装：25克/100克/500克
CAS号：6038-19-3
C4H7NOS·HCl=153.63
人胚胎皮肤成纤维细胞；HES操作步骤级别：BR
含量：≥98.0%
熔点：235～240℃
性状：结晶或粉末
用途：生化研究。
保存：RT
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