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人晶体上皮细胞永生系；SRA01/04（HLE）操作步骤
点击次数：121发布时间：2017/11/10 14:39:42
更新日期：2021/11/4 0:55:13
所 在 地：中国大陆
产品型号：
相关标签：ＡＴＣＣ细胞
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详细内容
细胞名称 人晶体上皮细胞永生系；SRA01/04（HLE）操作步骤
形态特性 上皮样
生长特性 贴壁生长
特征特性
培养条件 DMEM-H: Dulbecco＇s Modified Eagle＇s Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose) 20%FBS
传代方法 1:3传代；3~4天1次。
传代情况
冻存条件 基础培养基+8%DMSO+20%FBS
支原体检测 培养法（-）
STR Amelogenin：X，Y；CSF1PO：11，13，15；D13S317：10；D16S539：10；D18S51：13；D19S433：14；D21S11：27，28，31；D2S1338：23，24；D3S1358：14，15；D5S818：11，12，13；D7S820：10，11，13；D8S1179：14，15；FGA：19，20，22.2；TH01：6，7；TPOX：8；vWA：17，20
同工酶
染色体
使用权限 B类
人晶体上皮细胞永生系；SRA01/04（HLE）操作步骤培养温馨提示：
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3）从文献等处引用的信息本中心未进行核实，仅供参考。
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人晶体上皮细胞永生系；SRA01/04（HLE）操作步骤复苏操作要点：
1）将培养基在37℃水浴锅预热；准备一个15mL无菌的离心管，加入8mL预热培养基。
2）将冻存细胞从液氮罐中取出，快速放入37℃水浴锅中复温（可准备一洁净的烧杯，装满37℃的水，细胞冻存管取出后迅速放入烧杯内，再逐步转移到水浴锅中）。轻轻晃动冻存管，使细胞能在1~2min内完全解冻，使细胞能尽快通过*易受损的温度段（-5~0℃）。注意冻存管管口不能没入水中，BIU-87(人膀胱癌细胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭冻存管后再置于超净台内，将管内细胞转移至准备好的离心管内，轻轻吹打液体，使细胞均匀分散，降低DMSO浓度，吹打时避免产生气泡。用新鲜培养基洗管壁2次，均转移至离心管内。
4）800rpm离心5min，弃上清，加入新鲜的培养基，吹打制成细胞悬液。
5）将细胞悬液转移至T25细胞瓶内，补加适量的培养基，轻轻晃动细胞瓶使细胞分布均匀，放入温箱内培养。
6）第二天观察细胞贴壁生长情况，换新鲜培养基以去除死细胞。继续培养，待细胞长至80~90%汇合时正常传代。一般刚复苏的细胞需经过2~3次传代，细胞活力恢复后才能进行后续的实验。
人晶体上皮细胞永生系；SRA01/04（HLE）操作步骤 操作步骤：
人晶体上皮细胞永生系；SRA01/04（HLE）操作步骤 操作步骤：
1. 将无菌的盖玻片置于细胞培养皿中，将细胞悬液接种于培养皿中进行细胞爬片，待细胞长至80%时取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室温孵育爬片20min，使细胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻断内源性过氧化物酶，室温孵育15min（一般用甲醇或蒸馏水稀释30%过氧化氢），PBS冲洗3次，每次3min。
5. 封闭血清室温孵育20min，PBS冲洗3次，每次3min。
6. 细胞特异性一抗孵育：按照抗体说明书稀释比例稀释好一抗，滴加在爬片上，于4°C湿盒中孵育一夜，PBS冲洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：选与一抗对应的二抗，按比例稀释后滴加在爬片上，37°C湿盒中孵育30min，PBS冲洗3次，每次3min。
8. 将爬片周围水渍吸干，爬片上滴加新鲜配制的DAB显色液，显微镜下观察，当出现棕黄色或棕褐色的阳性信号时用蒸馏水冲洗终止显色。
9. 复染：用Harris苏木素复染30s~1min，水洗后用1%的盐酸酒精分化，再用蒸馏水（或PBS）水洗返蓝。
10. 封片：将中性树胶滴在爬片一侧，再用盖玻片盖上，先放平盖玻片一侧再轻轻放下另一侧，以免产生气泡，封好的爬片平放置于通风厨中晾干。
11. 镜检观察。
CFN98544http://www.chemfaces.com/natural/Cinobufagin-CFN98544.html470-37-1CinobufaginSteroids>=98%C26H34O6442.5520mg
CFN98545http://www.chemfaces.com/natural/Bufotaline-CFN98545.html471-95-4BufotalineSteroids>=98%C26H36O6444.5620mg
CFN98547http://www.chemfaces.com/natural/Rutundic-acid-CFN98547.html20137-37-5Rutundic acidTriterpenoids>=98%C30H48O5488.7120mg
CFN98605http://www.chemfaces.com/natural/Wilforgine-CFN98605.html37239-47-7WilforgineSesquiterpenoids> 95%C41H47NO19857.8 10mg
CFN98549http://www.chemfaces.com/natural/Methyl-salicylate-CFN98549.html119-36-8Methyl salicylatePhenols>=98%C8H8O3152.15100mg
CFN98551http://www.chemfaces.com/natural/Citric-acid-CFN98551.html77-92-9Citric acidMiscellaneous98%C6H8O7192.1220mg
CFN98554http://www.chemfaces.com/natural/Ophiopogonin-A-CFN98554.html11054-24-3Ophiopogonin ASteroids>=98%C41H64O13764.9410mg
CFN98555http://www.chemfaces.com/natural/Ophiopogonin-B-CFN98555.html38971-41-4Ophiopogonin BSteroids>=98%C39H62O12722.9110mg
(L)-2-哌啶甲酸/L(-)-2-哌啶酸；L-高脯氨酸；L-哌啶-2-羧酸；L-哌啶酸；L-哌啶-2-甲酸；(S)-(-)-2-哌啶酸；L-2-哌啶羧酸/L(-)-Pipecolinic acidA0528
中文名称： (L)-2-哌啶甲酸
其他中文名称： L(-)-2-哌啶酸；L-高脯氨酸；L-哌啶-2-羧酸；L-哌啶酸；L-哌啶-2-甲酸；(S)-(-)-2-哌啶酸；L-2-哌啶羧酸
英文名称： L(-)-Pipecolinic acid
其他英文名称： (S)-(-)-2-Piperidinecarboxylic acid
产品规格： BR，98%
包装：5克/25克/100克
CAS号：3105-95-1
C6H11NO2=129.16
人晶体上皮细胞永生系；SRA01/04（HLE）操作步骤级别：BR
含量：≥98%
比旋光度：-25.5～-27.5o(c =4 water)
性状：至类结晶粉末，溶于水，溶于稀酸，微溶于无水乙醇、丙酮和，存在于种子，麦芽，食用菌，水果等
用途：生化研究。
保存：RT
