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EB病毒转化的人B淋巴细胞；KMY0911操作步骤
点击次数：137发布时间：2017/11/10 15:40:50
更新日期：2021/11/4 1:25:09
所 在 地：中国大陆
产品型号：
相关标签：ＡＴＣＣ细胞
优质供应
详细内容
细胞名称 EB病毒转化的人B淋巴细胞；KMY0911操作步骤
形态特性 淋巴母细胞样
生长特性 悬浮生长
特征特性 该细胞系来源于一无精症男性患者的外周血。2009年由中科院昆明细胞库通过EB病毒转化的方法建立。
培养条件 RPMI 1640 (w/o Hepes) 15%NBS
传代方法 1:2传代；5-6天一次
传代情况 P2
冻存条件 基础培养基+8%DMSO+20%FBS
支原体检测 荧光法（-）
STR -
同工酶
染色体
使用权限 A类
1）将培养基在37℃水浴锅预热；准备一个15mL无菌的离心管，加入8mL预热培养基。
2）将冻存细胞从液氮罐中取出，快速放入37℃水浴锅中复温（可准备一洁净的烧杯，装满37℃的水，细胞冻存管取出后迅速放入烧杯内，再逐步转移到水浴锅中）。轻轻晃动冻存管，使细胞能在1~2min内完全解冻，使细胞能尽快通过*易受损的温度段（-5~0℃）。注意冻存管管口不能没入水中，BIU-87(人膀胱癌细胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭冻存管后再置于超净台内，将管内细胞转移至准备好的离心管内，轻轻吹打液体，使细胞均匀分散，降低DMSO浓度，吹打时避免产生气泡。用新鲜培养基洗管壁2次，均转移至离心管内。
4）800rpm离心5min，弃上清，加入新鲜的培养基，吹打制成细胞悬液。
5）将细胞悬液转移至T25细胞瓶内，补加适量的培养基，轻轻晃动细胞瓶使细胞分布均匀，放入温箱内培养。
6）第二天观察细胞贴壁生长情况，换新鲜培养基以去除死细胞。继续培养，待细胞长至80~90%汇合时正常传代。一般刚复苏的细胞需经过2~3次传代，细胞活力恢复后才能进行后续的实验。
EB病毒转化的人B淋巴细胞；KMY0911操作步骤 操作步骤：
EB病毒转化的人B淋巴细胞；KMY0911操作步骤 操作步骤：
1. 将无菌的盖玻片置于细胞培养皿中，将细胞悬液接种于培养皿中进行细胞爬片，待细胞长至80%时取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室温孵育爬片20min，使细胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻断内源性过氧化物酶，室温孵育15min（一般用甲醇或蒸馏水稀释30%过氧化氢），PBS冲洗3次，每次3min。
5. 封闭血清室温孵育20min，PBS冲洗3次，每次3min。
6. 细胞特异性一抗孵育：按照抗体说明书稀释比例稀释好一抗，滴加在爬片上，于4°C湿盒中孵育一夜，PBS冲洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：选与一抗对应的二抗，按比例稀释后滴加在爬片上，37°C湿盒中孵育30min，PBS冲洗3次，每次3min。
8. 将爬片周围水渍吸干，爬片上滴加新鲜配制的DAB显色液，显微镜下观察，当出现棕黄色或棕褐色的阳性信号时用蒸馏水冲洗终止显色。
9. 复染：用Harris苏木素复染30s~1min，水洗后用1%的盐酸酒精分化，再用蒸馏水（或PBS）水洗返蓝。
10. 封片：将中性树胶滴在爬片一侧，再用盖玻片盖上，先放平盖玻片一侧再轻轻放下另一侧，以免产生气泡，封好的爬片平放置于通风厨中晾干。
11. 镜检观察。
CFN92203http://www.chemfaces.com/natural/Mogroside-II-A2-CFN92203.html88901-45-5Mogroside II-A2Triterpenoids> 98%C42H72O14801.010mg
CFN92238http://www.chemfaces.com/natural/Ganoderenic-acid-C-CFN92238.html100665-42-7Ganoderenic acid CTriterpenoids> 95%C30H44O7516.710mg
CFN92299http://www.chemfaces.com/natural/8-shogaol-CFN92299.html36700-45-58-ShogaolPhenols> 98%C19H28O3304.410mg
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CFN92358http://www.chemfaces.com/natural/Deacetylasperulosidic-acid-CFN92358.html14259-55-3Deacetylasperulosidic acidIridoids> 98%C16H22O11390.310mg
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，Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌，B0044-3偶氮脒类引发剂V65/偶氮二异庚腈/2，2＇-偶氮二异庚腈/2，2＇-偶氮双(2，4-二甲基戊腈)/ 2,2’-偶氮-二-(2,4-二甲基戊腈)/偶氮二甲基戊腈/2,2＇-氮杂双异庚腈/ABVN/VAZO52高纯，98%100克4419/11/82-8℃，避光
，Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌，500克
中文名称： 偶氮脒类引发剂V65
其他中文名称： 偶氮二异庚腈；2，2＇-偶氮二异庚腈；2，2＇-偶氮双(2，4-二甲基戊腈)；2,2’-偶氮-二-(2,4-二甲基戊腈)；偶氮二甲基戊腈；2,2＇-氮杂双异庚腈
英文名称： ABVN
其他英文名称： VAZO52；2，2＇-azobisisoheptonitrile；2,2＇-Azobis(2,4-dimethyl)valeronitrile
产品规格： 高纯，98%
包装：25克/500克
CAS号：4419-11-8
C14H24N4=248.37
级别：High purity grade
含量：≥98.0%(HPLC)
熔点：40～70℃
EB病毒转化的人B淋巴细胞；KMY0911操作步骤活化能：122KJ/mol
性状：结晶或粉末。溶于甲醇、甲苯和丙酮等有机溶剂，不溶于水。属于油溶性引发剂，10h半衰期分解温度：51℃（在甲苯中）
用途：生化研究。主要用作聚合引发剂。
保存：2～8℃，避光
EB病毒转化的人B淋巴细胞；KMY0911操作步骤培养温馨提示：
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