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EB病毒转化的人B淋巴细胞；KMY0927操作步骤
点击次数：217发布时间：2017/11/10 15:45:26
更新日期：2021/11/4 1:25:09
所 在 地：中国大陆
产品型号：
相关标签：ＡＴＣＣ细胞
优质供应
详细内容
细胞名称 EB病毒转化的人B淋巴细胞；KMY0927操作步骤
形态特性 淋巴母细胞样
生长特性 悬浮生长
特征特性 该细胞系来源于一成年男性的外周血。2009年由中科院昆明细胞库通过EB病毒转化的方法建立。
培养条件 RPMI 1640 (w/o Hepes) 15%NBS
传代方法 1:2传代；5-6天一次
传代情况 P2
冻存条件 基础培养基+8%DMSO+20%FBS
支原体检测 荧光法（-）
STR -
同工酶
染色体
使用权限 A类
EB病毒转化的人B淋巴细胞；KMY0927操作步骤操作步骤：
1. 将无菌的盖玻片置于细胞培养皿中，将细胞悬液接种于培养皿中进行细胞爬片，待细胞长至80%时取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室温孵育爬片20min，使细胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻断内源性过氧化物酶，室温孵育15min（一般用甲醇或蒸馏水稀释30%过氧化氢），PBS冲洗3次，每次3min。
5. 封闭血清室温孵育20min，PBS冲洗3次，每次3min。
6. 细胞特异性一抗孵育：按照抗体说明书稀释比例稀释好一抗，滴加在爬片上，于4°C湿盒中孵育一夜，PBS冲洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：选与一抗对应的二抗，按比例稀释后滴加在爬片上，37°C湿盒中孵育30min，PBS冲洗3次，每次3min。
8. 将爬片周围水渍吸干，爬片上滴加新鲜配制的DAB显色液，显微镜下观察，当出现棕黄色或棕褐色的阳性信号时用蒸馏水冲洗终止显色。
9. 复染：用Harris苏木素复染30s~1min，水洗后用1%的盐酸酒精分化，再用蒸馏水（或PBS）水洗返蓝。
10. 封片：将中性树胶滴在爬片一侧，再用盖玻片盖上，先放平盖玻片一侧再轻轻放下另一侧，以免产生气泡，封好的爬片平放置于通风厨中晾干。
11. 镜检观察。
EB病毒转化的人B淋巴细胞；KMY0927操作步骤复苏操作要点：
1）将培养基在37℃水浴锅预热；准备一个15mL无菌的离心管，加入8mL预热培养基。
2）将冻存细胞从液氮罐中取出，快速放入37℃水浴锅中复温（可准备一洁净的烧杯，装满37℃的水，细胞冻存管取出后迅速放入烧杯内，再逐步转移到水浴锅中）。轻轻晃动冻存管，使细胞能在1~2min内完全解冻，使细胞能尽快通过*易受损的温度段（-5~0℃）。注意冻存管管口不能没入水中，BIU-87(人膀胱癌细胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭冻存管后再置于超净台内，将管内细胞转移至准备好的离心管内，轻轻吹打液体，使细胞均匀分散，降低DMSO浓度，吹打时避免产生气泡。用新鲜培养基洗管壁2次，均转移至离心管内。
4）800rpm离心5min，弃上清，加入新鲜的培养基，吹打制成细胞悬液。
5）将细胞悬液转移至T25细胞瓶内，补加适量的培养基，轻轻晃动细胞瓶使细胞分布均匀，放入温箱内培养。
6）第二天观察细胞贴壁生长情况，换新鲜培养基以去除死细胞。继续培养，待细胞长至80~90%汇合时正常传代。一般刚复苏的细胞需经过2~3次传代，细胞活力恢复后才能进行后续的实验。
EB病毒转化的人B淋巴细胞；KMY0927操作步骤培养温馨提示：
1）公司努力实现为科学研究提供实验细胞技术服务。所提供的实验细胞及其子代，不能用于人体实验和临床诊断、治疗。
2）公司细胞资源中心承诺尽努力对实验细胞资源相关信息进行及时更新。但限于我们的技术条件，中心不保证其准确性。
3）从文献等处引用的信息本中心未进行核实，仅供参考。
4）使用者在接收、处理、保存、丢弃、转让及使用细胞的时候要遵守国内外有关的法律法规，充分考虑可能存在的风险和责任，采取适当的安全和处理措施尽量降低对健康或环境的危害。
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，Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌，B0045-3环偶氮脒类引发剂V601/偶氮二异丁酸二甲酯/紫外吸收剂V601/2,2’-偶氮二-(2-甲基丙酸甲酯)/二甲基双氮异氢酸/AIBME高纯，98%100克2589-57-32-8℃，避光
，Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌，500克
中文名称： 环偶氮脒类引发剂V601
其他中文名称： 偶氮二异丁酸二甲酯；紫外吸收剂 V601；2,2’-偶氮二-(2-甲基丙酸甲酯)；二甲基双氮异氢酸
英文名称： AIBME
其他英文名称： Dimethyl 2,2＇-azobis(2-methylpropionate)；2,2-Azobisisobutyric acid dimethyl ester
产品规格： 高纯，98%
包装：25克
CAS号：2589-57-3
C10H18N2O4=230.26
级别：High purity grade
含量：≥98%(HPLC)
熔点：22～28℃
EB病毒转化的人B淋巴细胞；KMY0927操作步骤活化能：127KJ/mol
性状：淡黄色结晶粉末，溶于甲醇、甲苯，不溶于水，不含氰基，是一种油溶性引发剂。10h半衰期分解温度：66℃（在甲苯中）
用途：生化研究。用作聚合物自由基引发剂，如聚合物多元醇POP的引发。
保存：2～8℃，避光
