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非洲绿猴肾细胞系/HCV-p7；Vero-HCV-p7操作步骤
点击次数：117发布时间：2017/11/30 16:36:07
更新日期：2021/11/4 11:55:12
所 在 地：中国大陆
产品型号：
相关标签：ＡＴＣＣ细胞
优质供应
详细内容
细胞名称 非洲绿猴肾细胞系/HCV-p7；Vero-HCV-p7操作步骤
形态特性 上皮样细胞
生长特性 贴壁生长
特征特性 Vero-HCV-P7细胞整合有丙型肝炎病毒的P7基因，能稳定表达P7蛋白，是HCV基础研究的极好摸型。它由武汉大学病毒学国家重点实验室郭佳博士于2008年构建并保存。
培养条件 DMEM-H: Dulbecco＇s Modified Eagle＇s Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose) 10%FBS
传代方法 1:3传代,2-3天传一代
传代情况 C23
冻存条件 基础培养基+8%DMSO+20%FBS
支原体检测 阴性
STR
同工酶 同工酶鉴定
染色体
使用权限 A类
非洲绿猴肾细胞系/HCV-p7；Vero-HCV-p7操作步骤复苏操作要点：
1）将培养基在37℃水浴锅预热；准备一个15mL无菌的离心管，加入8mL预热培养基。
2）将冻存细胞从液氮罐中取出，快速放入37℃水浴锅中复温（可准备一洁净的烧杯，装满37℃的水，细胞冻存管取出后迅速放入烧杯内，再逐步转移到水浴锅中）。轻轻晃动冻存管，使细胞能在1~2min内完全解冻，使细胞能尽快通过*易受损的温度段（-5~0℃）。注意冻存管管口不能没入水中，BIU-87(人膀胱癌细胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭冻存管后再置于超净台内，将管内细胞转移至准备好的离心管内，轻轻吹打液体，使细胞均匀分散，降低DMSO浓度，吹打时避免产生气泡。用新鲜培养基洗管壁2次，均转移至离心管内。
4）800rpm离心5min，弃上清，加入新鲜的培养基，吹打制成细胞悬液。
5）将细胞悬液转移至T25细胞瓶内，补加适量的培养基，轻轻晃动细胞瓶使细胞分布均匀，放入温箱内培养。
6）第二天观察细胞贴壁生长情况，换新鲜培养基以去除死细胞。继续培养，待细胞长至80~90%汇合时正常传代。一般刚复苏的细胞需经过2~3次传代，细胞活力恢复后才能进行后续的实验。
非洲绿猴肾细胞系/HCV-p7；Vero-HCV-p7操作步骤培养温馨提示：
1）公司努力实现为科学研究提供实验细胞技术服务。所提供的实验细胞及其子代，不能用于人体实验和临床诊断、治疗。
2）公司细胞资源中心承诺尽努力对实验细胞资源相关信息进行及时更新。但限于我们的技术条件，中心不保证其准确性。
3）从文献等处引用的信息本中心未进行核实，仅供参考。
4）使用者在接收、处理、保存、丢弃、转让及使用细胞的时候要遵守国内外有关的法律法规，充分考虑可能存在的风险和责任，采取适当的安全和处理措施尽量降低对健康或环境的危害。
非洲绿猴肾细胞系/HCV-p7；Vero-HCV-p7操作步骤操作步骤：
1. 将无菌的盖玻片置于细胞培养皿中，将细胞悬液接种于培养皿中进行细胞爬片，待细胞长至80%时取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室温孵育爬片20min，使细胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻断内源性过氧化物酶，室温孵育15min（一般用甲醇或蒸馏水稀释30%过氧化氢），PBS冲洗3次，每次3min。
5. 封闭血清室温孵育20min，PBS冲洗3次，每次3min。
6. 细胞特异性一抗孵育：按照抗体说明书稀释比例稀释好一抗，滴加在爬片上，于4°C湿盒中孵育一夜，PBS冲洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：选与一抗对应的二抗，按比例稀释后滴加在爬片上，37°C湿盒中孵育30min，PBS冲洗3次，每次3min。
8. 将爬片周围水渍吸干，爬片上滴加新鲜配制的DAB显色液，显微镜下观察，当出现棕黄色或棕褐色的阳性信号时用蒸馏水冲洗终止显色。
9. 复染：用Harris苏木素复染30s~1min，水洗后用1%的盐酸酒精分化，再用蒸馏水（或PBS）水洗返蓝。
10. 封片：将中性树胶滴在爬片一侧，再用盖玻片盖上，先放平盖玻片一侧再轻轻放下另一侧，以免产生气泡，封好的爬片平放置于通风厨中晾干。
11. 镜检观察。
SKAP55蛋白抗体规格:?0.1ml英文名称：SKAP55
沉默调节相关蛋白2抗体规格:?0.1ml英文名称：SIRT2
肿瘤/睾丸抗原11.2抗体规格:?0.1ml英文名称：SPANXB1
平滑肌蛋白抗体规格:?0.1ml英文名称：Smoothelin
SHROOM1蛋白抗体规格:?0.1ml英文名称：SHROOM1
磷酸化沉默调节蛋白1抗体规格:?0.1ml英文名称：Phospho-SirT1 (Ser27)
SCK蛋白抗体规格:?0.2ml英文名称：SHC2
磷酸钠协同转运蛋白抗体规格:?0.1ml英文名称：SLC34A2
精氨酸结合蛋白2抗体规格:?0.2ml英文名称：SORBS2
唾液酸结合性免疫球蛋白样凝集素1抗体规格:?0.2ml英文名称：Sialoadhesin
细胞周期蛋白SG2N抗体规格:?0.2ml英文名称：Striatin 3
STRN4蛋白抗体规格:?0.2ml英文名称：Striatin 4
1. 平置血涂片于染色架上，滴加试剂一3～5滴，使其迅速盖满血膜，染色1分钟左右，以固定血片
2. 不要倒丢试剂一，直接滴加试剂二6～10滴，轻摇玻片或用洗耳球对准血涂片吹气使染液充分混合，染色5～8分钟
3. 水洗30秒，待干后镜检
染色结果：
1. 红细胞呈浅红色，中央稍淡而略有蝶形态
2. 白细胞系统清晰易分，细胞膜清晰呈紫黑色，细胞核着色呈深浅不同的紫红色，胞浆浅红色。胞浆中各种颗粒区分明显。其中中性粒细胞胞浆中颗粒呈淡紫红色、嗜酸粒细胞胞浆中颗粒呈桔红色、嗜碱性粒细胞胞浆中颗粒呈蓝褐色；单核细胞的胞浆呈灰蓝色，胞浆中颗粒呈细小淡紫红色或蓝紫色；淋巴细胞胞浆呈淡蓝色
注意事项：
1、 推片：取全血3微升左右置载玻片上，将推玻片保持与载玻片30度角，置于血滴正前方，稍往后移与血滴接触，即可见血液沿推片下缘散开，再匀速沿载玻片平面平稳向前滑动，至血液铺完血膜为止。
2、 涂片时不要太厚也不要太薄。太厚红细胞重叠并易皱，太薄时不易找到白细胞。
3、 用蜡笔在血膜两头划线，平放于染色架上。血膜要干透后才能染色，否则染色时血膜易脱落。
4、 试剂一及二染液不能过少，以防很快蒸发引起染液沉淀。试剂一不可少于400微升，试剂二是试剂一的1倍量。滴加试剂一及二时要轻摇玻片或用洗耳球对准血片吹气，使染液充分混合。
5、 冲洗时不能先倒掉染液，应以流水冲，防染料沉着。溃洗 时间也不能太长。一般在30~50秒左右。
染色过淡，可复染。染色过深，可用水冲洗或浸泡，还可用70%乙醇脱色3~5秒。
性状：液体
非洲绿猴肾细胞系/HCV-p7；Vero-HCV-p7操作步骤用途：生化研究。应用于血液和骨髓涂片染色。仅供科研
性状：浅绿色粉末。是复合中性染色剂。对原生质的染色有嗜中性、嗜碱性和嗜酸性部分的作用。溶于乙醇，不溶于水。吸收波长 640(522)nm
用途：生化研究。显微镜涂片用染色剂，如血、骨髓的染色、血液中寄生虫染色(原 虫、利什曼原虫、血丝虫等)。
保存：RT
