透射电镜观察细胞样品实验检测 

一、 实验仪器与试剂

表格一：实验仪器

表格二：试剂

二、 实验步骤

1.  醛类固定：加入1mL 2.5%戊二醛溶液（PBS 稀释），4度固定过夜；

2．清洗：用PBS清洗4次，每次静置15min；

3．固定：用1%溶液 4度固定2h；

4．清洗：用PBS清洗4次，每次静置15 min；

5．脱水：用50%、70%、80%、90%乙醇梯度脱水各静置15min(在70%乙醇中静置过夜)，再用100%乙醇脱水2次，每次静置20min；

6．置换：用丙酮置换2次，每次静置15min；

7.  浸渍：过程如下：

A．丙酮：包埋剂=2：1（体积比）的浸渍液中浸渍1h；

B．丙酮：包埋剂=1：2（体积比）的浸渍液中浸渍4h；

C．纯包埋剂浸渍2次, 每次24h；

8． 包埋：将样品放入盛有纯包埋剂的包埋板中；

10．聚合：将包埋板置于65℃条件下各聚合48h以上；
11．修块：将包埋头修成梯形，且样品表面积小于0.2mm×0.2mm；

12．超薄切片：切片厚度70nm；

13．染色：醋酸双氧铀染色 10min后清洗；

          醋酸铅染色 10min后清洗；

14. 上机检测。

透射电镜制备注意事项(细胞)

1、细胞数量: > 1*10的6次方;

2、消化细胞时要注意不要过度，及时用含血清的培养液终止消化;

3、终止消化后，预冷的PBS (pH 7.4 )洗细胞1-2次离心(1500rpm, 5min)弃上清(细胞收集在1.5ml的EP管中) ;

4、加入1mL 2.5%戊二醛溶液(需用PBS配制该溶液)，可用吸管轻轻吹散细胞，使细胞悬浮于固定液中;

5、4度固定过夜后寄出 (寄送时加冰袋，并用2.5%戊二醛溶液将EP管中剩余空间充满)。

肾脏组织样本制备步骤：

1、迅速取材；2、PBS漂洗2次，切成小块（米粒大小）；3、快速放入2.5%戊二醛固定液中，4度固定过夜；4、固定液将整个容器里面的空间都充满，封口膜封口；5、多加冰袋运输。

我司拥有成熟的技术团队和科学的管理规范，实验流程均严格按照SOP操作，公司拥有的各类的仪器设备为各类服务的顺利开展及质量提供有力的支撑。公司已经建立起多个实验平台，包括细胞培养、克隆构建、病毒包装、组织分析、分子检测等。

原创作者：上海创凌生物科技有限公司