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ZETA LIFE细胞增殖及毒性检测-Cell Counting Kit(CCK试剂盒)
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旗舰版地址:http://www.shlc-bio.com
详细内容
价格:¥615 - 2800
品牌:ZETA LIFE .
货号:K009
产地:USA
供应商:上海徕创生物科技有限公司
数量:1000
英文名:cck8
保质期:24 months
保存条件:4°C避光保存
规格:500T-3000T
CellCounting Kit简称CCK试剂盒,是一种基于WST (水溶性四唑盐,化学名: 2- (2-甲氧基-4-硝苯基) -3- (4-硝苯基) -5-(2,4-二磺基苯) -2H四唑单钠盐)的广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速高灵敏度检测试剂盒。
CCK是MTT的一种升替代产品,和MTT或其他MTT类似产品如XTT. MTS等相比有明显的优点:
-CCK被线粒体内的脱氢酶还原成的formazan是水溶性,不需要有特定的溶解液来溶解,而WST和XTT、MTS产生的formazan都不是水溶性的,因而可以省去后续溶解步骤。
-CCK比XTT和MTS更加稳定,使实验结果更加稳定。
-CCK和MTT、XTT等相比线性范围更宽,灵敏度更高。
CCK法与其他检测方法之间的比较:
操作说明:
一、制作标准曲线(测定细胞具体数 量时)
1、先用细胞计数板计数所制备的细胞悬液中的细胞数量,然后接种细胞。
2、按比例(例如: 1/2比例)依次用培养基等比稀释成-一个细胞浓度梯度,一般要做3-5个细胞浓度梯度, 每组3-6个复孔。
3、接种后培养2- 4小时使细胞贴壁,然后加CCK试剂培养-定时间后测定OD值, 制作出一条以细胞数量为横坐标(X轴),
OD值为纵坐标(Y轴)的标准曲线。根据此标准曲线可以测定出未知样品的细胞数量(试用此标准曲线的提是实验的条件要一
致,便于确定细胞的接种数量以及加入CCK后的培养时间)。
二、 细胞活性检测
1、在96孔板中接种细胞悬液(100ul孔)。将培养板放在培养箱中预培养(在379C, 5% CO2的条件下)。
2、向每孔加入110ul的CCK 溶液(注意不要在孔中生成气泡,它们会影响OD值的读数)。
3、将培养板在培养箱内孵育14小时。
4、用酶标仪测定在450nm处的吸光度。
5、如果暂时不测定OD值,打算以后测定的话,可以向每孔中加入10ul 0. 1M的HCL溶液或者1% wIv SDS溶液,并遮盖培养
板避光保存在室温条件下。在24小时内吸光度不会发生变化。
三、细胞增值~毒性检测
1、在96孔板中配置100u的细胞悬液。将培养板在培养箱预培养24小时(在379C,5% CO2的条件下)。
2、向培养板加入10ul不同浓度的待测物质。
3、将培养板在培养箱孵育一段适当的时间(例如: 6、 12、24或48小时)。
4、想每孔加入10ul CCK溶液(注意不要再孔中生成气泡,它们会影响OD值的读数)。
5、将培养板在培养箱内孵育1-4小时。
6、用酶标仪测定在450nm处的吸光度。
7、如果暂时不测定OD值,打算以后测定的话,可以向每孔中加入10ul 0. 1M的HCL溶液或者1% wIv SDS溶液,并遮盖培养板避光保存在室温条件下。在24小时内吸光度不会发生变化。
注意:如果待测物质有氧化性或还原性的话,可在加CCK之更换新鲜培养基(除去培养基,并用培养基洗涤细胞两次,然后加入新的培养基),去掉药物影响。当然药物影响比较小的情况下,可以不更换培养基,直接扣除培养基中加入药物后的空白吸收即可。
备往:
①建议先做几个孔摸索接种细胞的数量和加入CCK试剂后的培养时间。
②有条件的情况下建议采用多通道移液器,可以减少平行孔减的差异。加入
CCK试剂时,建议斜贴着培养板壁加,不要插到培养基页面下加,容易产生气泡,会干扰OD值读数。
③白细胞可能需要培养较长时间。
④当使用标准96孔板时,贴壁细胞的小接种量至少为1 ,000个/孔L(100u培养基)。检测白细胞时的灵敏度相对较低,因此
推荐接种量不低于2500个/F孔(100ul培养基)。如果要使用24孔板或6孔板实验,请先计算每孔相应的接种量,并按照每孔培养基总体积的10%加入CCK溶液。
⑤如果没有450nm的滤光片,可以使用吸光度在430-490 nm之间的滤光片,但是450nm滤光片的检测灵敏度高。
⑥培养基中酚红的吸光度可以在计算时,通过扣除空白孔中本底的吸光度而消去,因此不会对检测造成影响。
动计算:
细胞活力*(%)=[A(加药)-A(空白)]/[A(0加药)-A(空白)]x100
A(加药):具有细胞、CCK溶液和药物溶液的孔的吸光度
A(空白):具有培养基和CCK溶液而没有细胞的孔的吸光度
A(0加药):具有细胞、CCK溶液而没有药物溶液的孔的吸光度
*细胞活力:细胞增殖活力或细胞毒性活力
保存条件:
49C避光保存,有效期一年。
温聲提示:不可用于临床治疗。
热门标签:ZETA LIFE细胞增殖及毒性检测