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产品组成

产品简介

All-in-One RT SuperMix for qPCR(with dsDNase) 是一款高效、便捷、减少污染的高质量一链cDNA 合成试剂盒，包含M-MLV GIIIReverse Transcriptase 及其反应Buffer、RNA 酶抑制剂、dNTPs,Oligo(dT)20VN 和随机引物等一链cDNA 合成所需的所有组分，仅需加入RNA 模板和水即可开始反应。All-in-One RT SuperMix for qPCR(withdsDNase) 作为升后的一链cDNA 合成试剂盒，15 分钟内长可获得12 kb cDNA，产物可用于qPCR、普通PCR 等实验。从组织或细胞中提取的RNA 往往残留基因组DNA 污染，如果反转录不做去除处理，下游进行qPCR 反应时基因组DNA 与cDNA会同时进行扩增，尤其是引物设计在同一外显子上时，影响定量准确性。本试剂盒所采用的dsDNase 能够特异性消化双链DNA 或DNARNA杂合双链中的DNA，并且具有热敏感性，在逆转录反应温度下即可快速不可逆地失活。与传统使DNase I 去除基因组DNA 污染的方法相比，dsDNase 无需额外加入EDTA 进行失活，不仅节省实验时间，而且降低了对逆转录反应的抑制。可依据基因组DNA 污染严重程度，选择去基因组DNA 污染与反转录分开进行，或者去基因组DNA 污染与反转录一步进行的操作方法。

使用方法

针对基因组DNA 含量低的RNA 样品（推荐方案）

① 于冰上配制如下反应体系：

a. 推荐使用试剂盒提取的高质量RNA 作为模板。

② 轻柔吸打混匀，瞬离；

③ 37℃温育2 min，以去除基因组DNA 污染；

④ 55℃温育15 min；

⑤ 反应结束后，85℃温育2 min 以终止反应；

⑥ 迅速将获得的cDNA 置于冰上，用于后续实验；或立即保存于-20℃。

针对基因组DNA 含量高RNA 样品

1. 基因组DNA 污染去除

① 于冰上配制如下反应体系：

a. 推荐采用试剂盒提取的RNA 作为模板。

② 轻柔吸打混匀，瞬离；

③ 37℃温育2 min，以去除基因组DNA 污染；

注：若RNA 中基因组DNA 污染严重，可适当延长37℃温育时间至5 min。

④ 65℃温育2 min，使dsDNase 失活，然后置于冰上。

2. diyi链cDNA 合成

① 于冰上配制如下反应体系：

② 轻柔吸打混匀，瞬离；

③ 50℃温育15 min；

注：若目标RNA 不含Poly(A) 结构，可预先25℃温育10 min。

④ 反应结束后，85℃温育2 min，以终止反应；

⑤ 将获得的cDNA 溶液置于冰上，用于后续实验。

注：cDNA 溶液置于-20℃储存，建议不超过1 周；置于-80℃可长期储存。

注意事项

预混液中已经包含Oligo(dT)20VN 和随机引物，不仅适用于包含Poly(A) 结构的真核生物mRNA，也适用于不含Poly(A) 结构的原核生物RNA、真核生物rRNA 和tRNA 等模板，但不适用于miRNA 等小RNA 模板。

美国Azaood公司成立于2004年，是一家开发和生产用于生命科学研究、诊断和生物技术应用的高质量纯化酶、蛋白质、核酸和细胞分离试剂盒、胎牛血清的行业导者；Azood公司是通过了ISO9001认证的主要制造商，可以满足从研究到大规模批量生物加工和OEM应用与要求的公司。