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SF17A昆虫细胞无血清培养基厂家直销价格

价格:¥电议

品牌名称:$brandModel.Title(进口品牌)型号: 原产地:中国大陆 发布时间:2019/4/28 12:55:14更新时间:2024/1/4 13:19:47

产品摘要:SF17A昆虫细胞无血清培养基厂家直销价格 SF17A是种适于昆虫细胞培养的无血清无蛋白培养基,含有Pluronic F-68、谷氨酰胺、碳酸氢钠。

产品完善度: 访问次数:1166

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详细内容

本公司日报道:

产品资料

品名:SF17A昆虫细胞无血清培养基

货号:SF10105-2

规格:1L

价格:270元

产品特点

SF17A是种适于昆虫细胞培养的无血清无蛋白培养基,含有Pluronic F-68、谷氨酰胺、碳酸氢钠。针对Sf9 、Sf21和High-Five 昆虫细胞系的无血清培养而开发和优化,适于通过昆虫细胞杆状病毒表达系统表达外源蛋白,使用该培养基可获得高滴度野生型AcNPV。细胞可以从无血清或者添加血清的培养基中直接转移到SF17A中进行传代培养,而无需经过适应。该培养基可以支持Sf9、Sf21和High-Five 细胞贴壁或者悬浮生长。Sf9 、Sf21和High-Five 细胞在SF17A培养基中通常可以达到1×10 7 cells/ml 的细胞密度,细胞活性大于95%,传代超过20 次而细胞活性不降低。

细胞复苏:

1.迅速将冻存的细胞放入37 度水浴中(<1min)。

2.将冻存管中的细胞转移到合适的培养容器中,用预热过的培养基将细胞稀释至0.5~0.8×106 cells/ml。

3.将细胞放入生化培养箱(无湿度、二氧化碳控制)中的摇床上,27±0.5°C ,90~120 rpm。

4.当细胞密度达到2×106 cells/ml 以上时进行传代培养。建议在蛋白或者病毒制备细胞应至少传代三次以上。

细胞悬浮培养传代

昆虫细胞对剪切力非常敏感,必须保证搅拌培养过程中桨叶不能与容器壁或者容器底部接触。

1.使用自动或者半自动细胞计数仪,或者手动计数的方法测定细胞密度。

2.向无菌容器中加入预热的培养基,将细胞按照0.5~0.8×106 cells/ml 的密度接种其中(125ml 的摇瓶可以接种20~30 ml,100 ml 的转瓶(spinner bottle)可以接种50~75 ml)。

3.培养箱温度27±0.5°C ,不需要湿度和二氧化碳控制。

4.摇床转速90-120 rpm,转瓶搅拌转速设定为60~95 rpm(因仪器参数不同,建议在培养时对转速进行优

化)。

5.当细胞密度达到2×106 cells/ml 以上时,可以进行传代。

注意事项:如果观察到培养物中有细胞碎片,建议将细胞悬液100 g 离心5~10 min,弃上清,用新鲜培养基将细胞重悬,这样可减少细胞碎片和代谢副产物的积累。

注意:建议控制细胞培养代次,每隔段时间需要重新复苏支低代次的细胞

细胞贴壁培养传代

1.当细胞达到80~90%汇合度时,将培养上清去除。

2.添加4 mL 预热培养基(25 cm2),反复吹打制备细胞悬液。

3.观察细胞是否全部脱落。

4.如果部分细胞结团,将全部细胞转移到离心管中,静止1~2 min,细胞团会沉降到离心管的底部。用枪头轻轻碾压细胞团促使细胞分散。如果细胞团比较大,可以重以上步骤。用枪头吹打过重会造成细胞活性降低。

5.计数细胞密度。

6.按照2~8×104 cells/cm2 的密度接种到新培养瓶中,培养基按照5 mL/cm2 的量进行添加。

7.置于生化培养箱中培养,27±0.5°C ,不需要湿度和二氧化碳控制。

8.培养三天后将培养上清去除,靠近方瓶侧将新鲜培养基缓慢添加到方瓶中。

注意:Sf9 细胞为非贴壁依赖型细胞,可以在贴壁培养和悬浮培养两种培养模式之间进行多次转换,而且细胞活性、形态和生长速率基本无区别。

将细胞适应至SF17A培养基中,在适应过程中,细胞活性非常重要,必须不低于90%,并处于对数生长中期。

直接悬浮适应

单层培养的细胞,只需要在传代时直接将培养基更换为SF17A。

按照以下步骤将悬浮培养的细胞转移至该培养基中:

1.将细胞悬液100×g 离心5~10 min,将上清去除。

2.使用预热过的SF17A培养基将细细胞重悬,细胞密度不低于8×105 cells/mL,转移至合适的容器中进行

培养。

3.置于培养箱中进行培养,监测细胞生长情况。

逐步适应

按照贴壁培养或悬浮培养传代方法和以下方法进行逐步适应。

1.在适应过程中细胞密度不低于0.8×106 cells/mL。

2.在传代培养过程中逐步增加SF17A培养基的比例,SF17A培养基与初始培养基的比例逐渐升高(25:75,

50:50,75:25,全部的SF17A)。在某个比例培养基中进行培养有可能要多次传代培养。

细胞冻存

1.准备处于对数生长中期的细胞,细胞活性>90%。

2.确定需要的细胞数量和冻存液体积,冻存液中细胞密度应达到0.5~1.0 × 107 cells/ml。

3.冻存液由82.5%SF17A,7.5% DMSO,10% 胎牛血清组成(血清也可以不添加)。冻存液4°C 保存。

4.将培养物100 g 离心6 min,去除上清,使用冻存液重悬细胞。

5.根据培养规模将细胞分装于合适的冻存管中,如4.5 ml~5.0 ml/支。

6.细胞可以在液氮中长期稳定保存,但不确定长保存期限。

参数规格

液体:

SF17A培养基,1L 液体,SF10105-2__

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