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技术文章
MCE | RNA 逆转录小提示
点击次数：639 发布时间：2021/8/27 9:57:55
Tips 1：防止 RNA 模板的降解
Tips 2：RNA 定量
Tips 3：去除基因组 DNA 污染
Tips 4：选择合适的引物
Oligo dT 引物和随机引物都能进行逆转录。Oligo dT 引物只能与 mRNA 的 3’ 端 poly (A) 结合，没有 rRNA 和 tRNA 的干扰，特异性强。但其对 RNA 的完整度和二级结构的要求较高，而且不适用于原核生物。随机引物可以根据碱基情况结合到几乎所有的 RNA 上，包括 mRNA、tRNA 和 rRNA。但随机引物法逆转录产生的片段较小，很难得到全长转录本的 cDNA。
单独选择某一种引物，实验可能都不行，具体需要根据实验目的来确定。当然我们还可以选择全都要！MCE RT mix 含有比例优化的 Oligo (dT) 和 Random Primers，使 cDNA 合成可从 RNA 转录本的各个区域起始，并具有相同的逆转录效率，大程度让 qPCR 结果的真实性和可重复性。
图 2. Oligo dT 引物和随机引物
Tips 5：逆转录酶热稳定性
MCE 逆转录试剂盒
2、逆转录时间缩短至 15 min，大效率逆转录；
3、合并 gDNA digester 与 gDNA digester buffer，使用更方便；
4、与模板的亲和力增强，少量模板及低拷贝基因的逆转录同样适用。
图 3. 高 GC 基因表达量测定。模板 293T 细胞，RNA 投入 300 ng，反应体系 20 μL 55℃ 反应不同时间
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MCE 的所有产品仅用作科学研究或药证申报，我们不为任何个人用途提供产品和服务
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