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技术文章
细胞实验中的对照给药 | MedChemExpress
点击次数：424 发布时间：2021/10/8 17:20:32
空白对照 (Blank control) 是指不给予任何处理的对照。在细胞实验中，常用以评价及观察细胞是否处于正常状态。
如在 The role of ferroptosis in ionizing radiation-induced cell death ａnd tumor suppression 一文中，观察到 H460、A549 和 H1299 细胞系在没有任何处理的情况下，脂质过氧化水平没有任何变化，而暴露于 6 Gy IR 24 小时后，脂质过氧化相对水平升高。
图 1. 电离辐射诱导癌细胞中的铁死亡[1]
阳性对照 (Positive control) 是指按照当前实验方案一定能得到阳性结果的对照实验。因此，阳性对照具有质控的意义。另一方面，阳性对照还可以证明试验药和对照药之间的差别：优效性或等效性。
例如，为了研究 H. richardsonii 提取物 PP-360A 对癌细胞的有丝分裂的影响，研究者选用诺考达唑，紫杉醇作为阳性对照，这两种药物可以诱导有丝分裂停滞。阳性对照组表明：PP-360A 可以有效地诱导由有丝分裂停滞引起的细胞形态改变。如图 2A 所示，三种细胞系 (HT-29、M059K、WI-38) 用 PP-360A 处理后的细胞形态变圆，与诺考达唑处理组类似。免疫荧光染色结果 (图 2B) 显示细胞用 PP-360A 处理后，磷酸组蛋白 H3 (PH3) 和微管蛋白阳性细胞比率升高。
溶剂对照 (Vehicle control) 是*常见的阴性对照，一些化合物水溶性不好的化合物，需要用有机溶剂 DMSO、乙醇等配制储备液。如果溶剂在*终给药体系中占比较高，可能会对细胞本身状态有较大影响，这时，就会出现这样一个疑问：是药物的作用还是溶剂的毒性导致呢？
在鉴定具有抗黑色素瘤活性的柠檬苦素类天然产物的研究中，DMSO 溶剂对照组的设置很好地证明了 Haperforin G 在 MELHO 中诱导 G1 细胞周期阻滞和增殖停滞。
图 3. Haperforin G 对黑色素瘤细胞增殖和细胞周期的影响[4]
图 4. 细胞用 NC siRNA 或 CYP27A1 siRNA 转染处理 24 小时[4]
图 5. MITF 与黑素瘤细胞系中内源性 CYP27A1 启动子区域的结合[5]
小对照，大学问。一个科学系统的实验设计中必然少不了对照的身影。对照不仅能帮我们佐证实验结果的可行性，也能在实验失败时帮助我们排查导致失败的原因。怎么样，现在你学废了吗？
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参考文献
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2. Jumper J, Evans R, Pritzel A, et al. Highly accurate protein structure prediction with AlphaFold[J]. Nature, 2021:1-11.
3. Baek M, Dimaio F, Anishchenko I, et al. Accurate prediction of protein structures ａnd interactions using a three-track neural network [J]. Science.
4. Hyelim Cho, Qiong Shen, Lydia H Zhang, Mikiko Okumura, Akinori Kawakami, et al. CYP27A1-dependent anti-melanoma activity of limonoid natural products targets mitochondrial metabolism. Cell Chem Biol. 2021 Mar 30;S2451-9456(21)00143-4.
5. JIrwin J J, Tang K G, Young J, et al. ZINC20-A Free Ultralarge-Scale Chemical Database for Ligand Discovery [J]. Journal of Chemical Information ａnd Modeling, 2020, 60, 12, 6065–6073.
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