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技术文章

RIPA Lysis Buffer (Strong) | RIPA 裂解液

点击次数:15 发布时间:2024/12/17 7:58:49

MCE 的所有产品仅用作科学研究或药证申报,我们不为任何个人用途提供产品和服务。

RIPA 裂解液

MCE 站:RIPA Lysis Buffer (Strong)

品牌:MedChemExpress (MCE)

货号:HY-K1001

中文名称:RIPA 裂解液 (强)

存储条件:-20℃,1 年

产品活性:MCE RIPA Lysis Buffer (Strong)?是一种传统的细胞、组织快速裂解液,适用于 Western Blot (WB)、免疫沉淀 (IP) 及免疫共沉淀 (Co-IP) 等实验。

生物活性:MCE RIPA 裂解液 (Radio Immunoprecipitation Assay Lysis Buffer)是一种传统的细胞、组织快速裂解液,根据其裂解强度大致可以分为强、中、弱三类。RIPA 裂解液适用于 Western Blot (WB)、免疫沉淀 (IP) 及免疫共沉淀 (Co-IP) 等实验,例如大部分抗原表位的检测、胞浆磷酸化蛋白和细胞核转录因子检测等。 MCE RIPA 裂解液 (强)的主要成分为 50 mM Tris (pH 7.4),150 mM NaCl,1% Triton X-100,1% sodium deoxycholate,0.1% SDS,以及 sodiumorthovanadate,EDTA 等。RIPA 裂解液 (强) 不含全面的蛋白酶或磷酸酶抑制剂。为有效的防止蛋白降解,建议添加全面的蛋白酶和磷酸酶抑制剂。

操作流程:1. 裂解细胞样品 1.1 取适当量的裂解液,如有需要,在使用前数分钟内加入 Protease Inhibitor Cocktail (HY-K0010),Phosphatase Inhibitor Cocktails (HY-K0021、HY-K0022、HY-K0023) 或 Deacetylase Inhibitor Cocktail (HY-K0030),具体操作可参考相关产品说明书。准备好置于冰上备用。 1.2 贴壁细胞 去除培养液,用预冷的 PBS、生理盐水或无血清培养液洗 2 遍 (洗去血清中 IgG 干扰对 IP 和 Co-IP 实验是有益的,但对 WB 可能并非必要)。按照 6 孔板每孔加入 150-250 μL 裂解液的比例加入预冷的裂解液。用枪吹打数下,使裂解液和细胞充分接触。冰上放置 5-10 分钟,期间剧烈震荡 3-4 次,每次 30 秒,以充分裂解。 悬浮细胞 . 离心收集细胞,弃上清,用预冷的 PBS、生理盐水或无血清培养液洗 2 遍 (洗去血清中 IgG 干扰对 IP 和 Co-IP 实验是有益的,但对 WB 可能并非必要)。按照 6 孔板每孔加入 150-250 μL 裂解液的比例加入预冷的裂解液,再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多,必须分装成 0.5-5 × 106 cells/管,然后再裂解。冰上放置 5-10 分钟,期间剧烈震荡 3-4 次,每次 30 秒,以充分裂解。充分裂解后,14,000 g 低温离心5 分钟,取上清,即可进行后续的WB、IP 等操作。也可用液氮速冻后放 80°C 长期保存。 注:一般每 0.5-5 × 106 细胞用 1 mL 的 RIPA 裂解液裂解。细胞数量较高时,可加大裂解液用量 2. 裂解组织样品 2.1 取适当量的裂解液,如有需要,在使用前数分钟内加入 Protease Inhibitor Cocktail (HY-K0010),Phosphatase Inhibitor Cocktails (HY-K0021、HY-K0022、HY-K0023)或 Deacetylase Inhibitor Cocktail (HY-K0030),具体操作可参考相关产品说明书。准备好置于冰上备用。 2.2 将组织置于小皿中,冰上操作,剪切成细小的碎片。 2.3 按照每 20 mg 组织加入 150-250 μL 裂解液的比例加入预冷的裂解液。如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液,如果需要高浓度的蛋白样品,可以适当减少裂解液的用量。 2.4 用玻璃匀浆器冰上均质 30-50 次,或超声破碎细胞,每次 30 秒,3-4 次,每次间隔 1 分钟,置于冰上冷却。均质或超声破碎细胞后应镜检,细胞破碎率不小于 90%,同时组织已经完全裂解,没有明显的小组织块。 2.5 将匀浆物转移到离心管,冰上放置 5-10 分钟,期间剧烈震荡 3-4 次,每次 30 秒,以充分裂解。 充分裂解后,14,000 g 低温离心 5 分钟,取上清,即可进行后续的 PAGE、WB 和免疫沉淀等操作。 注:每 20 mg 冻存的小鼠肝脏组织用200 μL 本裂解液裂解后获得的上清,其蛋白浓度约为 15-25 mg/mL,不同状态的不同组织有所不同。

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品牌介绍:
•   MCE (MedChemExpress) 拥有200 多种全球独家化合物库,我们致力于为全球科研客户提供前沿*全的高品质小分子活性化合物;
•   50,000 多种高选择性抑制剂、激动剂涉及各热门信号通路及疾病领域;
•   产品种类涵盖各种重组蛋白,多肽,常用试剂盒 ,更有 PROTAC、ADC 等特色产品,广泛应用于新药研发、生命科学等科研项目;
•   提供虚拟筛选,离子通道筛选,代谢组学分析检测分析,药物筛选等专业技术服务;
•   设有专业的实验中心和严格的质控、验证体系;
•   提供 LC/MS、NMR、HPLC、手性分析、元素分析等各项质检报告,确保产品的高纯度、高品质;
•   产品的生物活性多经各国客户实验验证;
•   Nature, Cell, Science 等多种期刊及制药收录了MCE客户的科研成果;
•   专业团队跟踪*新的制药及生命科学研究进展,为您提供全球*新的活性化合物;
•   与世界各大制药公司及知名科研机构建立了长期的合作。

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