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稳定同位素——如何玩转质谱内标定量 - MedChemExpress
点击次数：338发布时间：2022/11/29
质谱分析具有灵敏度高、样品用量少、分析速度快、分离和鉴定同时进行等优点。随着质谱定量检测技术的广泛发展，稳定同位素类化合物作为内标定量 (Stable Isotope-Labeled Internal Standard，简称 SIL-IS) 目前已被公认为是质谱定量分析领域的极佳选择。因为稳定同位素类化合物与被分析物具有几乎完全相同的分子结构 (图 1)、化学性质、色谱和质谱行为，可以有效地消除电离变化和基质效应[1]，因而受到越来越多科研人员的推崇，广泛用于临床医学研究及生物医学、环境科学、食品检测等领域。
1. 稳定同位素作为内标的关键量值指标
a. 同位素产品纯度：一般 ≥ 98%。常指色谱纯度，如 LCMS/MS，GCMS，HPLC 等，如果产品吸收或者 MS 较弱，也可以用 NMR 检测等。
b. 同位素产品丰度 (Isotopic Enrichment)：一般 ≥ 98%。
2. 如何挑选稳定同位素内标
a. 除非实验特殊需求下，一般不选择有活泼氘 (2H) 取代的同位素产品作内标 (如氨基、羧基、羟基上的氢被氘取代)，这些活泼氘极易被交换为氢。
b. 同位素标记的 13C 和15N 化合物稳定性较好，但是 13C和15N 的价格相对较贵些。目前市场上含有氘 (2H) 的同位素产品因为价格相对便宜且数量相对较多，因此在满足实验要求的情况下，也可选择氘代物作为内标。
c. 选择氘 (2H) 代化合物作为内标时，一般选择比非同位素产品分子量多 3 及以上的产品 [即含有氘原子个数为 3 个 (D3) 或者以上]。
在有机分析研究中，质谱分析法比化学和光学分析法具有更加卓越的性能，而稳定同位素作内标成为了质谱定量的金标准，下面就随着小 M 来看下稳定同位素内标在质谱定量分析中的实际应用吧~
Candesartan 和 Irbesartan 已被证明能有效预防糖尿病视网膜病变造成的损伤。为了开发新型治疗此疾病的滴眼剂配方，Tan A 等人利用 Candesartan-d4 & Irbesartan-d4 稳定同位素做内标，开发了一种新的 LC-MS/MS 方法，此方法可同时定量测定出兔眼组织中 Candesartan & Irbesartan 的含量，并对该方法的浓度范围、准确度及精密度、基质效应、样品回收率等均做了验证。该方法也已成功应用于家兔的体内生物分布和药代动力学研究[2]。
图 2. Candesartan 和 Candesartan-d4, Irbesartan 和 Irbesartan-d4 的化学结构
图 3. 稳定同位素类化合物做内标实验流程图
那么如何操作呢？实验的具体过程如下：
(1) Candesartan & Irbesartan 标准液及其同位素内标液制备
(2) 样品前处理
(3) LC-MS/MS 分析样本
(4）数据分析
图 4. Candesartan 在角膜和房水样本中的
LC-MS/MS 色谱图
图 5. Ibuprofen 和 Ibuprofen-d3 的化学结构
图 6. Ibuprofen 及 Ibuprofen-d3 在血脂、
溶血和人血浆中的基质效应表，
跟着 M 君已经了解了这些稳定同位素内标在质谱定量分析中的应用，您目前是否也想尝试下稳定同位素产品在实验中的应用呢？下面就让 M 君带您浏览下 MCE 稳定同位素类产品吧！
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