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Q&A 汇总 | 细胞凋亡手册免费领啦!实验总抓狂?一册在手不迷茫~ | MedChemExpress (MCE)

点击次数:104发布时间:2024/10/17

上期 MCE 细胞凋亡主题直播的 Q&A 汇总来啦!希望能为您提供有价值的见解和实用技巧~还为您准备了萌家 《细胞凋亡实验手册》,干货满满,附有相关产品支持您的凋亡相关实验!快来随小 M 一起来看看吧~



01
实验手册

叮叮~,针对上期教师节特约直播,小 M 为大家准备了干货满满的 《细胞凋亡实验手册》,内容涵盖了细胞凋亡机制,各种经典的检测方法和相关检测试剂,并有详细的检测 Protocol 助力您的实验。


此外,MCE 还有更多产品指南,有需要的小伙伴可以速戳 ~
 
 
 
图片丨MCE 产品指南

废话不多说!我们一起来看看 上期凋亡直播的问答汇总吧~

02
Q&A汇总

在上次直播中,小 M 带着大家深入解析了三种主要的细胞凋亡相关知识 (详见往期直播:细胞凋亡:机制、标志物与检测方法的解决方案)

在和各位老师们的深入探讨中,有许多老师提出了许多精彩的问题,小 M 也是精心整理了一份 Q&A 汇总,涵盖了直播中讨论的热点话题和常见疑问,快来随小 M 一起看一下吧~


01


众多细胞检测凋亡的方式,该选哪一个呢?为什么选电镜 (TEM) 的比较少,而选 Western blot 的比较多?

检测细胞凋亡的方法有很多种,选择哪种方法需要考虑实验目的、样品类型、检测灵敏度、特异性、操作难度等因素。

1. 电子显微镜 (TEM) 的优势在于可以观察到细胞凋亡的典型形态学变化,如染色质凝聚、细胞质缩小、细胞膜皱缩等,以及细胞的超微结构,但需要专业设备和技术,操作复杂,样品制备耗时。TEM 通常用于研究凋亡的形态学特征和机制,不适合大规模样品检测。

2. 常见的检测方法是先用 Annexin V/PI 等方法进行初步验证,再用 Western blot 等方法验证关键蛋白的表达,Western blot 操作相对简单,可定量分析。

02


我想检测血小板凋亡,可以用哪种凋亡检测方式?

血小板的凋亡标志物包括线粒体内膜膜电位 (Δφm) 的去极化、细胞色素 c 的释放、促凋亡和抗凋亡蛋白 Bcl-2 家族的表达含量变化、Caspase-3 的激活、磷脂酰丝氨酸 (PS) 的暴露、血小板收缩、碎裂成微粒、血小板表面的水泡和丝状足挤压等 (PMID: 22383127)。常用的检测方法包括流式细胞术、Western blot 分析和电子显微镜 (TEM),是检查各种生理和病理环境中血小板凋亡的有用工具。

03


Annexin V/PI 双染的流式细胞术中,四个象限的细胞分别代表什么状态?

左上象限 Q1:Annexin V-/PI+,一般是机械损伤的细胞,如果这个象限的细胞特别多,需要排除实验操作异常。

右上象限 Q2:Annexin V+/PI+,此区域的细胞为晚期凋亡细胞和坏死细胞。

右下象限 Q3:Annexin V+/PI-,此区域的细胞为早期凋亡细胞。

左下象限 Q4:Annexin V-/PI-,此区域的细胞为活细胞。


04


凋亡的荧光检测方法中,流式细胞术和荧光显微镜检测哪个结果更准确一些呢?

在凋亡检测中,流式细胞术和荧光显微镜检测各有特点。

流式细胞术:可实现高通量分析,定量分析荧光强度,可实现对不同细胞群体的分析。但样本处理相对复杂,可能导致细胞损失或结果偏差。

荧光显微镜:可以通过荧光显微镜观察细胞形态变化,提供形态学信息,操作简单,适合小规模实验。但通常只能分析有限数量的细胞,结果的统计学意义较低,通常用于定性,难以进行准确的定量分析。

05


JC-1 一直染不出来是什么原因?改如何优化实验?

建议增加阳性对照 CCCP (HY-100941),对于大多数细胞,经 CCCP 处理后,线粒体膜电位会完全丧失,增加阳性对照可以 JC-1 失效或者实验操作的问题,然后再针对性的优化实验。

06


衰老细胞的线粒体膜通透性也会发生改变,检测膜电位能区分凋亡和衰老吗?

膜电位变化并不是凋亡或衰老的指标,建议结合其他检测方法和生物标志物的分析 (如 Annexin V/PI 染色、Caspase 活性检测、活性氧水平/β-gal 活性检测等),有助于更准确地评估细胞的生理状态。


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如果购买 MCE 细胞凋亡化合物库,不用自己寻找目标化合物吗?是否只需要提供靶点通路由 MCE 来帮忙找?如何仅筛选其中的部分化合物呢?

MCE 细胞凋亡化合物库(HY-L003)收录了 2,400+ 种凋亡相关产品,主要靶向凋亡信号通路种主要靶点,可以用于细胞凋亡信号通路及相关疾病的研究。

1. 如果您仅需要其中某些靶点或者信号通路的化合物,MCE 可根据您的需求进行匹配,定制您需要的化合物库。另外,我们也提供一站式药筛服务。

2. 如果您仅想筛选其中的部分化合物,也是可以根据您的需求定制的。比如,有些客户只想做老药,就可以保留 FDA 的,只想做新药,就可以保留还没上临床的;比如有些客户想要其中的代谢物或者天然产物等,因此,MCE 可根据您的需求来定制。

08


有的细胞凋亡抑制剂浓度过高或者处理时间过长会导致细胞死亡,应该怎么避免?

一般来说,细胞凋亡抑制剂可以抑制细胞内发生的凋亡,但浓度过高或者处理时间长可能会对细胞产生非特异性毒性、细胞代谢紊乱、激活其他细胞死亡通路 (如坏死性凋亡、自噬等),导致细胞死亡等。

建议您多查阅文献,并设置浓度梯度实验和时间梯度,选用文献报道的凋亡特异性抑制剂,以减少对其他细胞生理过程的干扰,并注意观察细胞的形态、增殖和存活情况,确定*佳实验条件。

09


如果我想要通过抑制 P53 去抑制凋亡通路,有什么可用的抑制剂吗?

有文献表明,p53 可通过不同的途径诱导细胞周期停滞和凋亡 (PMID: 29149101),抑制 p53 的研究主要集中在小分子抑制剂(如 PFT-α)和 RNA 干扰技术。

PFT-α  (HY-15484) 是一种小分子抑制剂,能够特异性抑制 p53 的活性。它通过与 p53 结合,阻止其转录激活功能,从而减少 p53 依赖的凋亡。在多种细胞模型中,PFT-α 被证明可以降低因化疗药物引起的细胞死亡。

此外,使用小干扰 RNA (siRNA) 或反义寡核苷酸 (ASO) 来特异性降低 p53 的表达,从而抑制其介导的凋亡。


10


Caspase 的抑制剂是通用的吗?在选择凋亡抑制剂时该如何选择?

Caspase 抑制剂是广泛应用的细胞凋亡抑制剂,例如如 Ac-DEVD-cho, z-VAD-fmk, Z-IETD-fmkZ-LEHD-fmk, 分别靶向 Caspase 3、泛-Caspase、Caspase 8、Caspase 9。然而,某些细胞和组织并不表达某种或者多种 Caspase,因此,首先要确定你的样本中 (细胞或者组织) 是否有表达这个 Caspase 蛋白,然后参考文献中的处理浓度和时间,看文献中有没有相同或者类似的模型,*终确定选择哪个抑制剂比较合适。

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细胞凋亡和细胞坏死能够同时存在吗?

细胞凋亡和细胞坏死能够同时存在。

细胞死亡是一个复杂的生物学现象,细胞凋亡和细胞坏死是两种不同的细胞死亡方式,细胞在不同的刺激下可能会经历不同的死亡途径。但细胞凋亡和细胞坏死也有共同存在的机制。

1. 在某些情况下,细胞可能同时经历凋亡和坏死。例如,在严重的氧化应激或细胞损伤下,细胞可能首先激活凋亡通路,但由于损伤过于严重或时间过长,*终转变为坏死 (PMID: 11035261)

2. 细胞凋亡和坏死的信号通路之间存在交叉。例如,在炎症性疾病中,某些炎症因子或细胞因子可以同时激活凋亡和坏死的相关信号通路 (PMID: 11997180)

3. 在某些疾病 (如肿瘤、神经退行性疾病等) 中,细胞凋亡和坏死也有可能同时发生,影响疾病的进展和治疗效果。

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确定凋亡的发生后是否有必要确定是内源或者外源的?

在某些情况下是必要的,确定是内源性还是外源性的有助于研究细胞发生凋亡的具体机制,有助于药物发现的研究。

例如,确定抗癌药物诱导癌细胞凋亡的具体途径可以明确抗癌机制,对临床上的用药具有一定的指导意义 (PMID: 33879127)。此外,凋亡的失调会导致疾病的发生,确定凋亡的具体机制有助于研究疾病的发病机制,助力药物开发。比如,Fas 信号通路缺陷的 Lpr 和 gld 小鼠会出现淋巴结肿大和脾肿大,并发展出一种类似于人类系统性红斑狼疮 (SLE) 的疾病,表明外源性凋亡通路在自身免疫病研究中发挥着重要作用 (PMID: 22683550)


产品推荐

Annexin V-FITC/PI 细胞凋亡检测试剂盒 (HY-K1073) 

凋亡检测试剂盒,FITC: 488/525 nm; PI: 535/617 nm。

JC-1 线粒体膜电位检测试剂盒 (HY-K0601)

线粒体膜电位试剂盒,可用于早期细胞凋亡检测。

Cleaved-Caspase 3 p12 antibody (HY-P80623)

凋亡检测抗体。Caspase-3 在凋亡时被剪切成 p17 和 p12 的两个片段。

ABT-737 (HY-50907) 

Bcl-2 抑制剂,引发内源性凋亡。

Ac-DEVD-cho (HY-P1001)

Caspase 3 抑制剂,凋亡抑制剂。

z-VAD-fmk (HY-16658B)

泛-Caspase 抑制剂,凋亡抑制剂。

细胞凋亡化合物库 (HY-L003)

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