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Dacomitinib是一种特异性的不可逆抑制剂ERBB家族抑制剂，作用于EGFR，ERBB2和ERBB4，IC50分别为6 nM，45.7 nM和73.7 nM

体外

Dacomitinib（PF00299804）有效抑制野生型EGFR的体外激酶活性（IC50=6 nM），具有相似的功效。Dacomitinib还有效抑制野生型ERBB2，IC50为45.7 nM。在H441中，使用达克替尼达到IC50，但仅在非常高的浓度（4μM）下达到并且可能反映了脱靶效应。在EGFR和K-ras（H322，H1819和Calu-3）的野生型细胞系中，吉非替尼和Dacomitinib均有效抑制H1819和Calu-3细胞的生长，但不抑制H322细胞的生长。Dacomitinib是泛ERBB抑制剂，大多数EGFR突变细胞系表达多个ERBB家族成员，对EGFR磷酸化的影响可能是间接的。Dacomitinib抑制所有不同EGFR T790M蛋白的EGFR磷酸化，而吉非替尼即使在10μM时也无效。在NIH3T3细胞中，EGFR L858R/T790M的磷酸化被1nM Dacomitinib完全抑制，而抑制EGFR WT/T790M或Del/T790M需要100nM或更高[1]。HER2扩增的细胞系对Dacomitinib的生长抑制*敏感（16个细胞系中14个IC50<1μM;87.5％），而HER2非扩增细胞系（不包括永生化细胞系）的28个细胞中有5个（17.9％）[2]]。

体内

为了评估达克替尼的功效，使用HCC827 GFP和HCC827Del/T790M细胞产生nu/nu小鼠中的异种移植物，并用Dacomitinib处理小鼠。达克替尼（每日口服强饲10mg/kg/d）有效抑制HCC827 GFP异种移植物的生长。相比之下，HCC827 Del/T790M异种移植物对吉非替尼具有抗性，而Dacomitinib治疗在抑制该异种移植模型的生长方面显着更有效

激酶测定

标记有谷胱甘肽S-转移酶的ERBB1，ERBB2和ERBB4的催化结构域在昆虫细胞中表达并纯化。进行基于ELISA的酶测定和ERBB1，ERBB2和ERBB4的IC50测定。对该研究中使用的所有其他激酶进行酶测定和IC50测定[1]。MCE尚未独立确认这些方法的准确性。它们仅供参考

Cell Assay

Dacomitinib(PF00299804)is prepared in DMSO ａnd stored(−20°C),and then diluted with appropriate medium

Cells are seeded in duplicate at 5×103 to 5×104 cells per well in 24-well plates,and growth inhibition data is calculated.Briefly,day after plating,Dacomitinib is added at 10μM ａnd 2-fold dilutions over 12 concentrations are carried out to generate a dose-response curve.Control wells without the drug are also seeded.The cells are counted on day 1 when the drug is added,as well as after 6 days when the experiment ended.After the trypsinization cells are placed in an Isotone solution ａnd immediately counted using a Coulter Z1 particle counter.The suspension cultures are counted using a Coulter Vi-Cell counter.MCE has not independently confirmed the accuracy of these methods.They are for reference onl 联系方式：