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Torin 1是一种有效的mTOR抑制剂，IC50为3 nM。Torin 1抑制mTORC1/2复合物，IC50值在2和10 nM之间

Torin 1的生物活性

体外

Torin1（250 nM）完全抑制增殖并导致G1/S细胞周期停滞，并且在野生型MEF中比50nM雷帕霉素更大程度地降低细胞大小[1]。Torin1在mTOR和PI3Kis之间的选择性超过800倍，并且相对于其他PIKK家族激酶具有非常高的选择性，但DNA-PK除外

体内

Torin1（20mg/kg，i.p。）在U87MG异种移植模型中是有效的，并且对肿瘤和外周组织中mTOR的下游效应物表现出良好的药效学抑制。

Torin 1的实验参考方法

激酶测定

为了产生可溶性mTORC1，产生HEK-293T细胞系，其使用水泡性口炎病毒G-假型MSCV逆转录病毒稳定表达N末端FLAG标记的Raptor。对于mTORC2，产生HeLa细胞，其稳定表达N末端FLAG标记的Protor-1。通过在50mM HEPES，pH7.4,10mM焦磷酸钠，10mMβ-甘油磷酸钠，100mM NaCl，2mM EDTA，0.3％CHAPS中裂解细胞来纯化两种复合物。将细胞在4℃下裂解30分钟，并通过在13,000rpm下微量离心10分钟除去不溶性级分。将上清液与FLAG-M2单克隆抗体-琼脂糖一起温育1小时，然后用裂解缓冲液洗涤三次，用含有终浓度0.5mol/L NaCl的裂解缓冲液洗涤一次。用50mM HEPES，pH 7.4,100mM NaCl中的100μg/mL 3×FLAG肽洗脱纯化的mTORC1。可以将洗脱液等分并储存在-80℃。激酶测定在30°C下进行20分钟，*终体积为20μL，由激酶缓冲液（25 mM HEPES，pH 7.4,50 mM KCl，10 mM MgCl2,500μMATP）和150 ng无活性S6K1组成，或者Akt1作为底物。加入80μL样品缓冲液终止反应，煮沸5分钟。随后通过SDS-PAGE和免疫印迹分析样品。MCE尚未独立确认这些方法的准确性。它们仅供参考。

细胞分析

在第0天，将96孔板接种每孔500个细胞并生长过夜。在第1天，用合适的化合物处理细胞，随后在第3-5天进行分析。为了分析，将板在室温下温育60分钟;向每个孔中加入50μLCellTiter-Glo试剂，并将板在轨道振荡器上混合12分钟。在标准板发光计上量化发光。MCE尚未独立确认这些方法的准确性。它们仅供参考 联系方式：