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Atglistatin是一种选择性的脂肪甘油三酯脂酶(ATGL)抑制剂，体外抑制脂解作用，IC50为0.7μM

体外

Atglistatin以剂量依赖性方式抑制野生型白色脂肪组织（WAT）的三酰基甘油（TG）水解酶活性，在浓度下高达78％。与野生型制剂相比，来自ATGL-ko动物的WAT裂解物中的TG水解酶活性降低约70％，并且阿格列汀对残留活性仅具有中等影响。联合使用Atglistatin和激素敏感性脂肪酶（HSL）抑制剂Hi 76-0079导致WAT的TG水解酶活性几乎完全抑制（~95％），这意味着大多数非ATGL活性可归因于HSL

体内

动物通过口服强饲法接受溶于橄榄油中的阿格列汀。施用后，收集血液和组织以测定血浆参数，组织三酰基甘油（TG）水平和抑制剂浓度。时程实验表明，脂肪酸（FA）和甘油的脂肪分解参数在施用后4和8小时降低，并在12小时后恢复正常。处理后8小时，在FA和甘油水平中观察到剂量依赖性降低，分别高达50％和62％。Atglistatin也导致血浆TG水平强烈降低（-43％），而血糖，总胆固醇，酮体和胰岛素水平没有显着变化。在腹膜内注射阿格列汀时，也观察到脂解的剂量和时间依赖性抑制

细胞分析

Atglistatin溶于DMSO并储存，然后在使用前用适当的培养基稀释。

对于基于MTT的体外生存力测定，将细胞以每孔1×10 4个细胞的初始密度接种在96孔板中，并在标准条件下培养24小时。第二天，用溶解在DMSO中的不同浓度的阿特加菌素或溶解在二甲基甲酰胺（DMF）中的顺铂作为阳性对照预处理细胞2小时。将培养基替换为相同的新鲜培养基并再次孵育指定的时间点。然后将细胞与100μL噻唑基蓝四唑溴化物（MTT）一起温育3小时。通过加入100μLMTT增溶溶液（0.1％NP-40,4mM HCl和无水异丙醇）溶解所得的紫色甲crystals晶体。在甲product产物完全溶解后，使用690nm作为参考波长在595nm处测量吸光度[1]。MCE尚未独立确认这些方法的准确性。它们仅供参考

Animal Administration

Atglistatin用橄榄油（通过强饲法口服）。

通过加入25％HCl产生盐酸阿格列汀，得到水溶性化合物，然后溶于含有0.25％Cremophor EL（pH7.1）的PBS（IP给药）。

小鼠

使用小鼠（C57B1/6J）。通过管饲法在橄榄油（200μL）中或通过IP注射口服阿曲汀。对于IP给药，我们通过加入25％HCl产生盐酸阿格列汀，得到水溶性化合物。对于腹膜内注射，将抑制剂干燥，用Tris碱缓冲过量的HCl，并将阿特-肝素溶解在含有0.25％Cremophor EL（pH7.1）的PBS中。通过管饲法在橄榄油（1.4mg/小鼠）中口服施用阿曲汀。8小时后，收集组织并使用Folch程序提取两次。将合并的有机相浓缩，在500μL氯——仿中重构，并进行固相萃取（SPE）。对于SPE样品，将样品加载到二氧化硅柱上，用2mL氯——仿洗涤两次，并用3mL氯——仿/甲醇（99/1，v/v）洗脱阿曲固素。将洗脱的样品浓缩，溶解在正丙醇/氯——仿/甲醇（8/1.3/0.6，v/v/v）中，并通过UPLC/MS（m/z 284，MH+;SYNAPT G1 qTOF HD质谱仪，Waters）分析。。MCE尚未独立确认这些方法的准确性。它们仅供参考。 联系方式：