联系方式：
AZD-1480是一种新颖的JAK2的ATP竞争性抑制剂，IC50值为<0.4 nM

体外

AZD1480（5μM）通过抑制Aurora激酶诱导G2/M阻滞和细胞死亡[1]。AZD1480是一种有效的JAK2抑制剂，可抑制人多发性骨髓瘤细胞的生长，存活，以及FGFR3和STAT3信号传导以及下游靶标，包括细胞周期蛋白D2。在低微摩尔浓度下，AZD1480阻断细胞增殖并诱导骨髓瘤细胞系的凋亡[2]。AZD1480有效阻断人和小鼠胶质瘤细胞中组成型和刺激诱导的JAK1，JAK2和STAT-3磷酸化，并导致细胞增殖减少和细胞凋亡诱导[3]。AZD1480是一种有效的，竞争性的JAK1/2激酶小分子抑制剂，能够以STAT3依赖性方式抑制STAT3磷酸化和肿瘤生长。AZD1480通过影响肿瘤微环境部分抑制肿瘤血管生成和转移[4]。

体内

AZD1480抑制人类实体瘤和多发性骨髓瘤的异种移植模型中的STAT3磷酸化[1]。在体内，AZD1480通过抑制STAT-3活性抑制皮下肿瘤的生长并增加携带颅内胶质母细胞瘤（GBM）肿瘤的小鼠的存活率，表明AZD1480对JAK/STAT-3途径的药理学抑制应考虑用于研究。治疗GBM肿瘤患者[3]。在小鼠同基因实验和自发转移模型中，AZD1480阻断骨髓细胞的肺浸润和肺转移的形成。此外，AZD1480可减少人类异种移植肿瘤模型中的血管生成和转移[4]。AZD1480抑制具有持久Stat3活性的人实体瘤异种移植物的生长

AZD-1480的实验参考方法

激酶测定

使用重组Jak1，Jak2或Jak3在50mM HEPES pH 7.3,1mM DTT，0.01％Tween-20,50mM/mL BSA和10mM MgCl 2的缓冲条件下进行AZD1480的抑制研究。Jak3酶在昆虫细胞中表达为N-末端GST融合物，并通过谷胱甘肽亲和力和尺寸排阻色谱法纯化。使用1.5μM肽底物（Jak1：FITC-C6-KKHTDDGYMPMSPGVA-NH2，Jak2和Jak3：）在AZD1480（10点剂量反应，一式三份，半对数稀释步骤中从8.3μM至0.3nM）存在下测定酶。FAM-SRCtide）并在它们各自的ATP Km（Jak1：55μM，Jak2：15μM，Jak3：3μM）下筛选并且接近5mM的生理ATP浓度。通过Caliper LC3000系统分离和定量磷酸化和未磷酸化的肽以计算抑制百分比。MCE尚未独立确认这些方法的准确性。它们仅供参考

细胞分析

将AZD1480溶解在DMSO中。

将Renca或786-O细胞悬浮于含有5％FBS的DMEM培养基中，并接种于96孔板（每孔5×103）中以使其粘附，然后用DMSO或AZD1480处理48小时。通过MTS测定确定细胞活力。用Mikrotek Laborsysteme测量490nm处的吸光度。从携带肿瘤的小鼠中富集小鼠内皮细胞和脾CD11b+/c-髓样细胞，并在5％FBS RPMI-1640培养基中培养。HUVEC在完全培养基中在胶原蛋白1包被的平板上培养。用DMSO和AZD1480以不同剂量处理所有细胞24小时。通过手动计数细胞数来确定细胞活力。所有实验重复3次。MCE尚未独立确认这些方法的准确性。它们仅供参考

Animal Administration

AZD1480 is suspended in water supplemented with 0.5%Hypromellose ａnd 0.1%Tween 80.

For subcutaneous(s.c.)tumor model,2.5×106 Renca or 786-O cells suspended in 100μL PBS are injected into the flank of BALB/c or nude mice,respectively.When average tumor volume reaches approximately 100-150 mm3,AZD1480 or vehicle is administered by oral gavage either once a day at the dose of 50 mg/kg,or twice daily at 30 mg/kg,as indicated.Tumor size is measured by caliper every other day.For experimental lung metastasis model,0.1×106 Renca or 1×106 786-O cells suspended in 500μL PBS are injected via tail vein to BALB/c or nude mice,respectively.Three days later,mice are orally treated with AZD1480(50 mg/kg/d)or vehicle for 21 days for Renca tumors ａnd 60 days for 786-O tumors respectively.For the Calu-6 model,3×106 tumor cells in matrigel are implanted s.c.into the flanks of nude mice,randomized into vehicle(twice daily,BID)and drug treatment(AZD1480,30 mg/kg BID)groups,and dosed orally daily for 19 days.For spontaneous lung metastasis model,2×105 4T1 cells suspended in 100μL PBS are injected in the mammary gland of female BALB/c mice by gently penetrating the skin.AZD1480(50 mg/kg/d)or vehicle is given orally for 21 days.MCE has not independently confirmed the accuracy of these methods.They are for reference only. 联系方式：