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大鼠胆固醇7α-羟化酶(CYP7A1)ELISA检测试剂盒
企业档案
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详细内容
大鼠胆固醇7α-羟化酶(CYP7A1)ELISA检测试剂盒待检样本为细胞培养上清液,血清, 血浆,尿液,组织液,心房水,体液标本等等,如果您准备代检测,
请寄标本时需注明以下情况:
1、标本编号;
2、所测项目;
3、是否做复孔;
4、联系方式;
5、实验后标本是否寄回。
大鼠胆固醇7α-羟化酶(CYP7A1)ELISA检测试剂盒检测原理:
采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。
保存:2-8℃
样品收集、处理及保存方法
1. 血清:使用不含热原和内毒素的试管,操作过程中避免任何细胞刺激,收集血液后,3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆:EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。
3. 细胞上清液:3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。3000转离心10分钟取上清。
5.裂解细胞:用胰酶消化后,离心收集细胞,每瓶细胞用100μl细胞裂解液,用吸管吹打数下,使细胞和裂解液充分接触,冰浴5min,12000 r/min于4℃离心30min,取上清,用于以下实验。
6. 保存:如果样本收集后不及时检测,请按一次用量分装,冻存于-20℃,避免反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
大鼠胆固醇7α-羟化酶(CYP7A1)ELISA检测试剂盒操作步骤
1. 从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4℃。
2. 设置标准品孔、样本孔和空白孔,空白孔什么都不加;标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;
3. 待测样本孔各加待测样本50μL;
4. 随后标准品孔和样本孔中(空白孔不加)加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体100μL,,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
5. 弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液,静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。
6. 所有孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
7. 所有孔加入终止液50μL,15min内,在450nm波长处测定各孔的OD值。
结果判断
绘制标准曲线:在Excel工作表中,以标准品浓度作横坐标,对应OD值作纵坐标,绘制出标准品线性回归曲线,按曲线方程计算各样本浓度值。
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0.1%蛋白胨水培养基 0.1% Peptone Water Medium ——用于样品制备 磷酸盐缓冲液( PBS 0.03mol/L, pH7.2) pH7.2PBS Broth ——用于样品制备 缓冲甘油-氯化钠溶液基础 Buffered glycerol – Sodium Chloride Solution Base ——用于样品制备, 每 90ml 添加 10ml 甘油 | 250g/瓶 1KG/瓶 250g/瓶 250g/瓶 |
磷酸盐缓冲液( 0.01M PBS) 0.01M PBS Broth ——用于样品制备 | 250g/瓶 |
1M 磷酸盐缓冲液( pH6.0) Phosphate solution(1M,pH6.0) 用于毕氏酵母表达培养基的制备 | 250g/瓶 |