大鼠钙调素(CAM)elisa试剂盒*今品化学新闻检测前准备工作:

　　1. 请提前20分钟从冰箱中取出试剂盒，以平衡至室温。

　　2. 将浓缩洗涤液用双蒸水稀释(1:20)。未用完的放回4℃。

　　3. 标准品: 加入标准品/标本稀释液0.5ml至冻干标准品中，静置15分钟，待其充分溶解后，轻轻混匀(浓度为1000 pg/ml)。然后根据需要进行稀释。(建议标准曲线使用以下浓度： 1000、500、250、125、62.5、31.25、15.6、0 pg/ml)。复溶标准品原液（1000 pg/ml）若未用完请分装后放入-20℃以下电冰箱内保存，保存两个月。已稀释的标准品请废弃。

　　4. 生物素化抗体工作液：按当次试验所需要得用量，使用前20分钟，以生物素化抗体稀释液稀释浓缩生物素化抗体(1:30)成工作浓度。当日使用。若实验次数过多导致生物素化 抗体量不足，可向我们公司单独购买生物素化抗体。（须提供抗体批号）

　　5. 酶结合物工作液：按当次试验所需要得用量，使用前20分钟，以酶结合物稀释液稀释浓 缩酶结合物(1:30) 成工作浓度。当日使用。若实验次数过多导致浓缩酶结合物量不足， 可向我们公司单独购买浓缩酶结合物。（须提供酶结合物批号）

　　洗涤方法:

　　1. 自动洗板机：要求注入的洗涤液为350ul，注入与吸出间隔15－30秒。洗板5次。

　　2. 手工洗板：甩尽孔内液体，在洁净的吸水纸上拍干，每孔加洗涤液350ul，静置30秒后甩尽液体，在厚迭吸水纸上拍干。洗板5次。

　　大鼠钙调素(CAM)ELISA试剂盒*今品化学新闻操作步骤:

　　1．从已平衡至室温的密封袋中取出试验所需板条，未用的板条和干燥剂请放回铝箔袋内压 实自封条，密封口袋，放回4℃。

　　2．空白孔加标准品和标本稀释液，其余相应孔中加标本或不同浓度标准品(100ul/孔)，用封板胶纸封住反应孔，36℃孵箱孵育90分钟。

　　3．提前20分钟准备生物素化抗体工作液。

　　4．洗板5次。

　　5．空白孔加生物素化抗体稀释液，其余孔加入生物素化抗体工作液(100ul/孔)。用新封板胶纸封住反应孔，36℃孵箱孵育60分钟。

　　6．提前20分钟准备酶结合物工作液。避光室温(22-25 ) ℃ 放置。

　　7．洗板5次。

　　8．空白孔加酶结合物稀释液，其余孔加入酶结合物工作液(100ul/孔)。用新封板胶纸封住反应孔，36℃孵箱，避光孵育30分钟。

　　9．打开酶标仪电源，预热仪器，设置好检测程序。

　　10．洗板5次。

　　11．加入显色底物(TMB)100ul/孔，避光36℃孵箱，避光孵育15分钟。

　　12．加入终止液100ul/孔, 混匀后即刻测量OD450值(3分钟内)。在仪器保存读数结果并打印一份纸质结果。

　　13．实验完毕后将未用完的试剂按规定的保存温度放回电冰箱保存至有效期结束。

　　建议保存酶标板框，以备下次或者今后试验使用。

　　结果判断:

　　1. 每个标准品和标本的OD值应减去空白孔的OD值。

　　2. 手工绘制标准曲线。以标准品浓度作横坐标，OD值作纵坐标，以平滑线连接各标准品的坐标点。通过标本的OD值可在标准曲线上查出其浓度。

3. 若标本OD值高于标准曲线上限，应适当稀释后重测，计算浓度时应乘以稀释倍数。

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