大鼠褪黑素(melatonin)elisa试剂盒*每日新闻待检样本为细胞培养上清液，血清， 血浆，尿液，组织液，心房水，体液标本等等，如果您准备代检测，

请寄标本时需注明以下情况：                                      咨询电话：132-9609-8065

1、标本编号；

2、所测项目；

3、是否做复孔；

4、联系方式；

5、实验后标本是否寄回。

大鼠褪黑素(melatonin)ELISA试剂盒*每日新闻检测原理：

采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。

保存：2-8℃

样品收集、处理及保存方法

1. 血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。

2. 血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。

3. 细胞上清液：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。

4. 组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000转离心10分钟取上清。

5.裂解细胞：用胰酶消化后，离心收集细胞，每瓶细胞用100μl细胞裂解液，用吸管吹打数下，使细胞和裂解液充分接触，冰浴5min，12000 r/min于4℃离心30min，取上清，用于以下实验。

6. 保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

大鼠褪黑素(melatonin)ELISA试剂盒*每日新闻操作步骤

1. 从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。

2. 设置标准品孔、样本孔和空白孔，空白孔什么都不加；标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；

3. 待测样本孔各加待测样本50μL；

4. 随后标准品孔和样本孔中（空白孔不加）加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

5. 弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。

6. 所有孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7. 所有孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。

结果判断

 绘制标准曲线：在Excel工作表中，以标准品浓度作横坐标，对应OD值作纵坐标，绘制出标准品线性回归曲线，按曲线方程计算各样本浓度值。

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