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操作步骤 

1.  标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔 10 孔，在、第二孔中分别加标

准品 100µl，然后在、第二孔中加标准品稀释液50µl，混匀；然后从孔、第二

孔中各取 100µl分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液 50µl，

混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取 50µl弃掉，再各取 50µl分别加到第五、第六孔

中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液 50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各

取 50µl 分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液 50µl，混

匀后从第七、第八孔中分别取 50µl 加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准

品稀释液 50µl，混匀后从第九第十孔中各取 50µl弃掉。（稀释后各孔加样量都为 50µl，

浓度分别为 150 pg/mL，100 pg/mL ，50 pg/mL，25pg/mL，12.5 pg/mL）。 

2.  加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样

品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液 40µl，然后再加待测样品 10µl（样

品*终稀释度为 5 倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混

匀。 

3.  温育：用封板膜封板后置37℃温育 30 分钟。 

4.  配液：将 30（48T的 20倍）倍浓缩洗涤液用蒸馏水30（48T的 20倍）倍稀释后备用。 

5.  洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30 秒后弃去，如此

重复 5次，拍干。

6.  加酶：每孔加入酶标试剂50µl，空白孔除外。 

7.  温育：操作同 3。 

8.  洗涤：操作同 5。 

9.  显色：每孔先加入显色剂 A50µl，再加入显色剂 B50µl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色

15 分钟.  

10.  终止：每孔加终止液 50µl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。 

11.  测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。 测定应在加终止

液后 15 分钟以内进行。

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