名称：小鼠凝血因子VIII相关抗原(VIII-Ag)elisa试剂盒*今品化学新闻

规格：48T/96T

原理：ELISA是以免疫学反应为基础，将抗原、抗体的特异性反应与酶对底物的高效催化作用相结合起来的一种敏感性很高的试验技术

包括：人、大鼠、小鼠、豚鼠、仓鼠、裸鼠、兔子、猪、犬、猴、马、牛、羊、鸡、鸭、鱼等等

标本：血清、血浆、细胞上清液、尿液、体液、灌洗液、脑脊髓、心房水、胸房水、组织等。

样品收集、处理及保存方法

1.  血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。

2.  血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。

3.  细胞上清液：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。

4.  组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000转离心10分钟取上清。

5.  保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

小鼠凝血因子VIII相关抗原(VIII-Ag)ELISA试剂盒*今品化学新闻操作流程如下：

（1）待测样品孔中每孔加入待测样品100μl，每种样品设3个平行孔；设两个阴性对照孔，每孔加未处理组的细胞裂解液100μl；另设一个空白对照孔，加入纯细胞裂解液100μl。　（2）酶标板置4℃，包被过夜。

（3）洗板：吸干孔内反应液，用洗涤液过洗一遍（将洗涤液注满板孔后，即甩去），之后将洗涤液注满板孔，浸泡1-2分钟，间歇摇动。甩去孔内液体后在吸水纸上拍干。重复洗涤3-4次。

（4）阴性对照孔每孔加入PBS 50μl，样品孔及空白孔每孔加入1:500稀释的兔抗人AIF抗体工作液50μl。　

（5）酶标板置37℃培养箱的湿盒内，孵育60min。　

（6）洗板，同（4）。　

（7）每孔加1:5000稀释的HRP-标记的山羊抗兔抗体工作液 100μl。　

（8）酶标板置37℃培养箱的湿盒内，孵育60min。　

（9）洗板，同（4）。　

（10）每孔加TMB显色液 100μl，轻轻混匀10s，置37℃暗处反应15-20min。　

（11）每孔加100μl 2mol/L H2SO4终止反应。　

（12）分别测450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2，*终测得的OD值为两者之差（W1-W2），以减少由容器上的划痕或指印等造成的光干扰。

（13）数据处理：在得出标本（S）和阴性对照（N）的 OD值后，计算S/N值。S/N≥2.1为阳性判定标准。

注：所用溶液配方

(1) PBS：称取0.2g KH2P04, 2.9g Na2HP04?12H20、8.0g NaCl, 0.2g KCl，加双蒸水至1000ml。

（2）包被缓冲液：称取1.59g Na2CO3, 2.938 NaHCO3，加双蒸水至 1000m1。

（3）洗涤液(PBST)：含0.05% Tween-20的PBS。

（4）稀释液：含0.1%牛血清白蛋白(BSA)的PBS，主要用以稀释抗体、标准品、样品。

（5）TMB显色液：称取1.84g Na2HP04.12H20, 0.51 g柠檬酸，加双蒸水至1O0ml，配成柠檬酸-磷酸缓冲溶液。用10.5 ml 柠檬酸-磷酸缓冲溶液溶解1锭TMB，再加入35μl 3% H2O2

（6）细胞裂解液：1% TritonX-100，137mmol/L NaCl，20mmol/L Tris-HCl，2mmol/L EDTA，1mmol/L PMSF，pH 7.4。（其中PMSF溶于异丙醇中，配成1O mmo/L，-20℃ 贮存备用。保存条件及有效期：

1.试剂盒保存：；2-8℃。2．有效期：6个月

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