脂肪酸合成酶（FAS）测试盒实验方法
产品内容：

试剂：液体×1 瓶，-20℃保存。用 1 d 取出置于 4℃充分解冻后混匀。

试剂二：粉剂×1 瓶。4℃保存。临用加入 220 μL 试剂四，充分溶解。

试剂三：粉剂×1 瓶，4℃保存。临用加入 220 μL 试剂四，充分溶解。

试剂四：液体 10ml×1 瓶，4℃保存。


试剂五：粉剂×1 瓶，4℃保存。临用加入 440μL 试剂四，充分溶解。


 脂肪酸合成酶（FAS）测试盒实验方法
产品简介： FAS 是脂肪酸合成关键酶，催化乙酰辅酶 A 和丙二酰辅酶 A 而生成长链脂肪酸。FAS 普遍表达 于各种组织细胞中，在哺乳动物肝、肾、脑、肺和乳腺以及脂肪组织中表达丰富。

测定原理： FAS 催化乙酰 CoA、丙二酰 CoA 和 NADPH 生成长链脂肪酸和 NADP+；NADPH 在 340nm 有 吸收峰，而 NADP+没有；通过测定 340nm 光吸收下降速率，计算 FAS 活性。

 FAS 测定操作：

1. 分光光度计预热 30min，调节波长到 340 nm，蒸馏水调零。 2. 试剂四置于 37℃水浴中预热 30 min 以上。 3. 空白管：在 1mL 石英比色皿中依次加入 100μL 蒸馏水、20μL 试剂二、20μL 试剂三、820μL 试 剂四和 40μL 试剂五，迅速混匀后于 340nm 处测定吸光值，记录第 30s 和 90s 时吸光值，分别记 录为 A1 和 A2。△A 空=A1-A2。 4. 测定管：在 1mL 石英比色皿中依次加入 100μL 上清液、20μL 试剂二、20μL 试剂三、820μL 试 剂四和 40μL 试剂五，迅速混匀后于 340nm 处测定吸光值，记录第 30s 和 90s 时吸光值，分别记 录为 A3 和 A4。△A 测=A3-A4。 Solarbio Beijing Solarbio Science & Technology Co., Ltd Tel: 400-968-6088 Fax: /82 Http://www.solarbio.com 第 2 页， 共 2 页 注意：空白管只需测定次。


FAS 活性计算：

（1） 按照蛋白浓度计算 活性单位定义：37℃中每毫克蛋白每分钟氧化 1μmol NADPH 为 1U。 FAS(U/mg prot) =[(△A 测定管–△A 空白管)÷ε÷d×V 反总×106 ] ÷(Cpr×V 样)÷T =1.61×(△A 测定管–△A 空白管) ÷Cpr （2） 按照样本质量计算 活性单位定义：37℃中每克组织每分钟氧化 1μmol NADPH 为 1U。 FAS(U/g) =[(△A 测定管–△A 空白管)÷ε÷d×V 反总×106 ] ÷(W×V 样÷V 样总)÷T =1.61×(△A 测定管–△A 空白管) ÷W （3） 按细胞数量计算 活性单位定义：37℃中每 104 个细胞每分钟氧化 1μmol NADPH 为 1U。 FAS(U/104 cell ) =[(△A 测定管 –△A 空 白 管 )÷ε÷d×V 反 总 ×106 ] ÷( 细胞数量 ×V 样 ÷V 样 总)÷T=1.61×(△A 测定管–△A 空白管) ÷细胞数量 （4） 按液体体积计算 活性单位定义：37℃中每 ml 样本每分钟氧化 1μmol NADPH 为 1U。 FAS(U/g) =[(△A 测定管–△A 空白管)÷ε÷d×V 反总×106 ] ÷V 样÷T =1.61×(△A 测定管–△A 空白管) ε：NADPH 摩尔消光系数，6.22×103 L/mol/cm；d：比色皿光径，1 cm；V 反总：反应体系总体 积，1000μL=0.001 L；Cpr：上清液蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，V 样：加入反应体系中上 清液体积，100μL=0.1 mL；T：反应时间，1min。

原创作者：上海仁捷生物科技有限公司