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技术文章
几丁质酶测试盒实验说明书
点击次数:252 发布时间:2021/5/12 9:01:49
几丁质酶测试盒实验说明书
测定意义:几丁质酶要存在于虾、蟹、昆虫等甲壳类动物的外壳与软体动物的器官(例如乌贼的软骨),以及真菌类的细胞壁中。而几丁质酶(EC 3.2.1.14)可催化几丁质水解,具有抵御真菌侵染的作用,成为抗真菌病害的研究热点。
测定原理:几丁质酶水解几丁质产生N-乙酰氨基葡萄糖,进步与对二甲氨基苯甲醛产生红色化合物,在585nm 处有特征吸收峰,吸收值增加速率反映了几丁质酶的活性。
自备实验用品及仪器:天平、水浴锅、离心机、可见分光光度计、1 mL 玻璃比色皿,蒸馏水。
注意:实验之建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者 增加样本量进行检测。
自备的仪器和用品: 天平、水浴锅、离心机、可见分光光度计、1 mL玻璃比色皿、研钵/匀浆器、蒸馏水。
几丁质酶测试盒实验说明书
样本处理
组织:按照组织质量(g):提取液体积 (mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.15g 组织,加入 1.5mL 提取液) 进行冰浴匀浆,然后 10000g,4℃,离心 20min,取上清,置冰上待测。 真菌:按照细胞数量(10 4 个):提取液体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建议 750 万细胞加入 1.5mL 提 取液),冰浴超声破碎细胞(功率 300w,超声 3s,间隔 7s,总时间 3min);然后 10000g,4℃,离心 20min,取 上清置于冰上待测。 培养液:直接测定。
原创作者:上海仁捷生物科技有限公司