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操作说明-大鼠表皮生长因子ELISA检测试剂盒
点击次数：60 发布时间：2021/6/16 21:02:58
【试剂配制】
1、 标准品
(1) 从试剂盒中取出一支标准品，于6000-10000rpm 离心30 。用1ml 样本稀释液溶解，并
用吸头对准冻存管底部反复吸打5 次以助溶解，充分混匀得到标准品S7，放置备用。
(2) 取7 个1.5 ml 离心管(S0-S6)依次排列，各加入250μl 样本稀释液。吸取250μl 标准品
S7 到*个离心管中(S6)，轻轻吹打混匀。从S6 中吸取250μl 到第二个EP 管中(S5)，
轻轻吹打混匀。以此类推进行标准品的倍比稀释。S0 为样本稀释液。
2、 洗液工作液
浓洗涤液按1:25倍用去离子水进行稀释。例如用量筒量取240ml去离子水，倒入烧杯或其
他洁净容器中，再量取10ml浓洗涤液，均匀加入，搅拌混匀，在临用配妥。浓洗涤液低温保
存会有盐析出，稀释时可在水浴中加温助溶。
3、 生物素标记抗体工作液
生物素标记抗体液按1:100倍用生物素标记抗体稀释液进行稀释。如10μl生物素标记抗体加
990μl生物素标记抗体稀释液，轻轻混匀，在临用10分钟内配妥。
4、 辣根过氧化物酶标记亲和素工作液
辣根过氧化物酶标记亲和素按1:100倍用辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液进行稀释。如
10μl辣根过氧化物酶标记亲和素加990μl辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液，轻轻混匀，在临用
10分钟内配妥。
实验原理
用纯化的抗体包被微孔板，制成固相载体，往包被抗C3抗体的微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的抗C3抗体、HRP标记的亲和素，经过chedi洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的C3呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值)，计算样品浓度。
标本的采集及保存
1. 血清：全血标本请于室温放置2小时或4℃过夜后于1000 x g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
2. 血浆：可用EDTA或肝素作为抗凝剂，标本采集后30分钟内于2 - 8° C 1000 x g离心15分钟，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
3. 细胞培养物上清或其它生物标本：请1000 x g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
4. 样本处理：血清或血浆标本推荐稀释10,000倍。
注：以上标本置4℃保存应小于1周，-20℃或-80℃均应密封保存，-20℃不应超过1个月，-80℃不应超过2个月；标本溶血会影响zui后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。
原创作者：山东华网智能科技股份有限公司
